烟粉虱对番茄黄化曲叶病毒传毒机理及研究.pdf

摘要 曼曼曼!!!!!曼量曼曼曼曼!!曼!曼曼曼曼曼曼皇曼曼!!曼!曼!!!曼曼曼詈鼍曼曼曼曼曼曼曼!!!曼笺皇置鼍曼量曼曼曼曼曼曼曼!!!!!曼鼍曼曼!曼 摘要 烟粉虱(Bemisiatabaci)是一种世界性的重大外来入侵性：害虫，危害包括蔬菜、棉花 在内的600多种寄主植物。20世纪90年代B型烟粉虱入侵我国并给我国园艺作物带来严重 经济损失，2003年在我国云南首次发现Q型烟粉虱，之后逐渐呈现出进一步扩张和取代B型 烟粉虱的趋势。近年的研究已经证明，Q型烟粉虱已经在我国大部分地区竞争取代了B型烟 粉虱而成为当地的主要危害生物型。与此同时，伴随着Q型烟粉虱种群的快速扩散，由烟粉 YellowLeafCurlVirus，简称TYLCM)导致的番茄黄化 虱传播的番茄黄化曲叶病毒(Tomato 曲叶病毒病在我国从南到北多地发生并流行蔓延，给我国的番茄生产带来了巨大的经济损失， 局部地区甚至整棚绝收。然而关于烟粉虱传播番茄黄化曲叶病毒的传毒机理以及伴随B、Q 型烟粉虱之间的竞争取代而发生的番茄黄化曲叶病毒病的大发生机制研究尚不清楚。因此， 本研究以目前生产上烟粉虱的主要危害生物型B型和Q型烟粉虱为对象，比较了B型和Q型 烟粉虱在不同时间内对TYLCV的获毒能力高低，克隆分析了B型和Q型烟粉虱次生内共生菌 分泌的传毒相关蛋白基因GroEL的蛋白序列，并对该基因进行体外的原核表达等相关研究， 以明确B型和Q型烟粉虱传播番茄黄化曲叶病毒病的部分机制，同时也为烟粉虱及番茄黄化 曲叶病毒病的预防和治理提供理论指导和科学依据。主要结果如下： (1)2011年秋季对北京海淀区、昌平区及河北廊坊地区的番茄黄化曲叶病毒病发病地区的 烟粉虱带毒率和生物型进行了随机抽样检测，结果表明：北京海淀区烟粉虱带毒率为4596， 昌平区南口为20％，而河北廊坊地区烟粉虱的带毒率则高达100％。所检测烟粉虱生物型均为 Q型，未见B型和其他非B／Q生物型。说明北京及河北局部地区的B型烟粉虱均被Q型完全 取代，田间出现番茄黄化曲叶病毒病也由Q型烟粉虱传播，不同地区发生程度不一致。 (2)采用荧光定量PCR技术比较了B、Q型烟粉虱在不同时间段捕获TYLCV能力的差异。结 果表明：在检测的五个时间段内(6h一72h)，Q型烟粉虱的病毒捕获量均显著高于B型；病毒 获取量达到饱和的时间也明显早于B型，提前了12h。表明Q型烟粉虱无论在获毒能力还是 在获毒时间上均显著强于B型烟粉虱。 (3)对室内饲养的番茄寄主上的B型、Q型烟粉虱次生内共生菌编码的与传毒相关的蛋白 一GroEL基因分别进行了克隆和序列分析。结果表明：入侵型烟粉虱次生内共生菌编码的 粉虱次生内共生菌GroEL基因的核苷酸序列相似性为99．94％，氨基酸序列的同源性为99．82％。 氨基酸序列分析表明，Q型烟粉虱相对于B型仅263位存在一个氨基酸位点的突变(V—A)。 通过荧光定量PCR技术比较了该基因在两种生物型烟粉虱体内表达量的差异，结果表明在两 种生物型内，带毒个体GroEL基因的表达量显著高于未获毒的烟粉虱个体，且该基因在Q型 烟粉虱体内的表达量是B型获毒状态下为1．66倍，非获毒状态下为1．28倍，且差异显著(P 0．05)。但两种生物型之间的蛋白质点突变是否会影响该蛋白质的空间构型进而影响B、Q型 烟粉虱在传毒能力上的差异需要进一步研究。 (4)烟粉虱次生内共生菌GroEL基因编码一种由555个氨基酸组成、大小为62kD的蛋白质。 东北农业大学理学硕士学位论文 ～ 寰皇曼蔓曼曼笪曼曼蔓曼!曼皇曼皇寰曼舅曼曼皇釜釜釜釜釜釜釜皇曼皇曼皇曼曼曼曼曼蔓曼舅 表达，经过Western blot检验证实得到一个大小为69kD的目的基因融合蛋白，说明B型、Q 垩!烟粉虱的Gr。EL基因分别在原核表达载体内实现了该蛋白的体外表达，为下～步研究比较 ：可：同生物型烟粉虱的传毒机制奠定了基础。 关键词烟粉虱：B生物型；Q生物型；番茄黄花曲叶病毒；GroEL：荧光定量PCR，原核表达 东北农业大学理学硕士学位论文 曼曼曼曼!!曼量曼!曼曼曼曼曼曼曼曼!曼!曼曼曼!曼篡曼鼍曼!曼曼曼曼曼曼曼!曼曼曼!曼蔓曼曼曼!曼竺曼曼曼曼曼皇!曼曼曼曼曼曼曼!曼