乙肝表面抗原基因植物表达载体构建及草莓再生体系建立.pdf

塞璧壅兰查璺壁圭堡塞 圣篷耋垩篓差釜墅楚竺查鲨燕釜塑垄蕉墨兰蔓墨兰堇委．!!!!兰 摘 要 B，HB，以下简称乙肝)是世界上分布最广泛的传染病之 乙型肝炎(Hepatitis virus，HBV，以下简称乙肝病毒)引起的。我 一，是由乙型歼灸病毒(HepatitisB 骂是乙型糖炎砖高发嚣，该病毒携带孝砖人数已达到甚蕊超过10％。始病呈幔蛙病 程，可引发急、慢性肝炎，严重的导致肝硬化甚至肝癌。目前尚无彻底治愈本病 的药物。预防和控制乙肝病毒(HBV)感染最主要的措施是接种乙肝疫苗。乙肝病 基因，将其转入酵母中，表达产物进行加工处理即为目前广池使用的己肝缡毒基 因工程疫苗，因其生产成本离，贮逡过程需要冷藏键，注射接种需要一定的设备 及专监医务人员，难以在广太发展孛国家箍广。 20世纪90牛代初，世界卫生组织提出豫要廉价、芥需冷藏的疫苗之后，查尔 斯J安特贞提出了一个设想，即通过植物基因工程来生产食用疫苗。就是将抗原 基瓣导入棱酾，镟英奋疆酶串表逮，人或劝物摄取泫疆物或葵孛的抗原蛋窃震， 就可以产生某抗原的免疫应答。目前乙型肝炎病舞的转基因食用疫苗研究已有很 大进展，HBsAg基因导入烟草、马铃馨、羽扇豆和莴苣、花生等械物中，有关HBsAg 基因导八攀莓孛的研究表见报遂。 用草舔为载体生产乙肝疫苗有如下特点：f1)改变7传统人类疫苗的按绅方 式，以口服草莓或草莓汁的途径来接种疫苗；(2)降低了疫苗的生产成本；(3) 可以诲转基霞莘蓐营分发爨各个跑嚣，薅餐逮栽耱后主声翡赫群草莓作为疫苗徭 给骞地，这种形式保证了疫苗的质量表生产的持续性，楚化了疫苗的保藏和运输 条件。 本研究筹在鞠建HBsAg的高表达载舔罔以转纯草莓，最终实现利用转基因草 莓生产口服乙肝疫苗，迭对于我国防治乙型肝炎蠢重要的意义。 童曼壅些墨堂璧主矍塞 羔壁查要热堡薹望楚竺耋鎏墼整整塑蓬墨兰矍墨兰堡蕉!!!童墨 我们对以下三方葡的内容进行了研究： T一栽体上，热激法转化大肠杆菌，对重组质粒中的插入片段进行DNA测序，证明 与RBsAg的碱基序弼基本稻翳。 其衍生物，因此这个基因可用于转化植物的筛选，把BADH基因从pBADH中共除， 将HBsAg基骂连入，旋其在瓶35 s瘩动子敬稍下，鞫建斑植物表达裁体p蕊。 3、检验了所构建的植物袁达载体。雷兜优化了百脒根的叶盘法转化体系， 之詹利用衣杆茵介导汝将pBH转入百脉根，获得了36株卡那霉素抗性筛选苗， 经PCR检测有9株为阳性，从而初步验证了该载体§§将}i J3sAg基鼹譬入植物孛。 为下一步转化草莓提供了表逡载体，为研究利用转基因革莓生产乙肝疫苗奠定良 好鲢基础。 关键涌：HBsAg载舔糖建蕾辕横逮僚转纯萆莓棱物疫麓 查楚壅些查兰壁圭整塞 §鐾耋垩楚墨鲞要楚兰查整墼整箜楚墼兰熏望兰羔婆生!!!墨 A．bstract whichiscaused oneof viraldisease themost by B(HB)is widespread Hepatitis wheremorethan10％of virus．Chinaisa area B outbreak hepatitis high people