第七章食品中常见病原菌微生物检验技术.ppt

我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌落总数、大肠菌群和致病菌三项。 致病菌：能够引起人类发病的细菌。对不同的食品和不同的场合，应该选择一定的参考菌群进行检验。 沙门菌生物学性状 三、检验程序 SN方法：以无菌方式进行多点取样25g+225ml缓冲蛋白胨水，经37℃水浴4h培养，进行非选择性增菌；确保濒于死亡的细菌进行复活。其后移取10ml转种于盛有100ml四硫磺酸盐煌绿增菌液，经42±1℃培养20±2h，进行选择性的增菌；使目的菌优胜出来。将增菌液摇匀，以无菌操作，分别接种DHL和BS平板上于37℃培养24±2h，进行分离培养；使目的菌分离出来。观察每个平板上的菌落，选取3-5个菌落接种于TSI或尿素酶琼脂上，于37℃中培养24±2h，进行筛选试验；将符合沙门氏菌特征的TSI中的培养物，接种于营养琼脂平板上，37℃中培养24±2h，进行纯化培养；选取单个菌落，接种于20E微量生化管中，进行API生化鉴定；同时取单个菌落，在洁净的玻板上，作血清学鉴定。 四、操作方法 分五个步骤：1.前增菌 2.选择性增菌 3.选择性平板分离 4.生化实验 5.血清型分型鉴定 四、操作方法 分五个步骤： 1.前增菌：用无选择性的培养基使处于濒死状态的细菌恢复活力;BPW 2.选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，其它细菌受到抑制;SC+TTB SC （亚硒酸盐胱氨酸增菌液）TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液） 胱氨酸促生长 四硫酸钠和煌绿抑菌 氯化镁和孔雀绿抑菌 适合伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌生长， 37℃适合其他沙门菌生长，42℃，18~24h. 为防漏检宜SC+TTB 3.选择性平板分离培养：BS+XLD/HE/显色培基 4.生化试验：（1）初步生化实验：三糖铁实验 （2）对疑似沙门氏菌继续作系统生化实验 最低限度生化实验：靛基质、尿素、KCN、赖氨酸。 鉴定分离出来的细菌是否符合沙门氏菌的生化谱，可采用API 20E 等成套生化试剂 5.血清型分型鉴定 A-F多价O血清：把ABCDEF各群含有的共同O抗原的抗体混合起来作成混合血清。 位相变异实验原理：在半固体培养基中加入已知相的血清，使解离出的已知相的菌体和血清发生反应，这样已知相的菌体就不能运动了，未知相的菌不能和血清发生反应，能够运动，并被解离出来。 血清学鉴定：特异性诊断血清鉴定到种 （一）增菌培养 前增菌称取 25 g（mL）样品放入盛有 225 mL BPW 的无菌均质杯中，以 8 000 r/min～10 000 r/min 均质 1 min～2 min，或置于盛有 225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。若样 品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定 pH 值，用 1 mol/mL 无菌 NaOH 或 HCl 调 pH 至 6.8±0.2。无菌操作将样品转至 500 mL 锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于 36 ℃±1 ℃培养 8 h～ 18h。如为冷冻产品，应在 45 ℃以下不超过 15 min，或 2 ℃～5 ℃不超过 18 h 解冻。 增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于 10 mL TTB 内，于 42 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。同时，另取 1 mL，转种于 10 mL SC 内，于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 分离 分别用接种环取增菌液 1 环，划线接种于一个 BS 琼脂平板和一个 XLD 琼脂平板（或 HE 琼脂 平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于 36 ℃±1 ℃分别培养 18 h～24 h （XLD 琼脂平板、HE 琼脂 平板、沙门氏菌属显色培养基平板） 或 40 h～48 h （BS 琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落, 各个平板上的菌落特征见表 1。 国标检测沙门氏菌方法分5个步骤： 　　1.前增菌： 在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。 沙门氏菌检测中前增菌的目的是使沙门氏菌恢复其活力。 检测经过加工的食品中的沙门氏菌需要前增菌主要因为加工过程中沙门氏菌受到损伤而处于濒死状态。　　　　　 2.选择性增菌 在含选择性抑制剂的培养基中，样品进一步增菌。 沙门沙门氏菌检测中增菌的目的是使沙门氏菌以外的细菌（主要是艾希氏菌属）受到抑制，而使沙门氏菌得到一定的增殖，提高沙门氏菌的检出率。?? 3.选择性平板分离 划线接种于： BS和XLD琼脂平板或HE琼脂平板各一个，于36+1℃分别培养18—24小时(XLD、HE)或40—48小时(BS)。 这一步采用固体选择性培养基