DNA分子标记在中药材鉴定中的应用的研究.pdfVIP

巾文摘要 中文摘要 中药品种的准确鉴定是中药质量控制的首要环节。现有的鉴别方法仍1i能解决一些 品种鉴定难的问题。如缺乏特征性理化成分的动物类药材、多来源药材、栽培后产生众 多变异类型的药材等。 DNA分子标记方法的逐步成熟，使得中药材以客观指标为依托的现代质量评价方法 得到了有益的补充，提供了解决上述难题的可能性。针对上述难点，本文探索使用多重 反应体系进行优化，建立了特异、稳定、快捷的中药材分子鉴定新方法。本论文主要分 以下三方面内容： 一、中药材DNA提取方法的探讨 本次研究选取具有代表性的含淀粉、多糖较多的人参、西洋参、半夏、天花粉药材， 在常规CTAB法基础上加以改进，将提取缓冲液中NaCl浓度提高到2．5mol·L～，有效地 去除了淀粉和其他多糖；延长温育时间至2h，小使用液氮研磨样品，提取缓冲液配方中 省去巯基乙醇、PVP等成分；用高纯水溶解DNA沉淀；提取步骤为：温育、氯仿萃取、沉 淀；使操作简化从而降低中药材DNA提取难度。 二、中药材位点特异性PCR方法鉴别 本文建立了多重位点特异性PCR方法鉴别中药材人参、西洋参。应用人参鉴别引物 体系优化，依据各自的特异条带进行鉴别。结果当退火温度为66。C时，卜H现249bp条带