纺锤体相关蛋白spindlin1甲基化组蛋白复合物的结构及研究.pdf

摘 要 本文利用结构生物学手段对纺锤体相关蛋白 spindlin1 与其甲基化的组蛋 白多肽底物所形成的复合物结构进行了研究。采用原核细胞大量表达的体外重组 蛋白，构建了 spin 基因的原核细胞表达载体 pET28a/SUMO 和 pGEX-2T，根据表 达结果，确认了能够得到大量带有 his-SUMO 标签和 GST 标签的可溶性重组 spindlin1。 在 LB 培养基培养的大肠杆菌表达菌株 BL21(DE3)中进行了目的蛋白的大规 模表达。电泳检测结果表明，在常规培养和诱导条件下（37℃培养；16℃， 0.3mmol/L IPTG 诱导表达），可以得到较为理想的重组 目的蛋白。 利用柱式层析方法分离纯化了目的蛋白，确立了稳定可重复的纯化策略，即 亲和层析→阴离子交换层析→凝胶过滤层析，得到了结晶纯、高浓度（约 24mg/mL 或 0.9mmol/L）的目的蛋白溶液，并用于结晶实验。 用纯化的目的蛋白产物进行结晶条件的筛选和优化，最终，确立了稳定可重 复且能够形成高质量晶体的结晶条件，即：0.1mol/L CAPS，pH=11；2.0mol/L （NH ）SO ；0.2mol/L Li SO ；0.1mol/L Glycine，得到的蛋白质晶体适合于衍 4 2 4