经BcL-2基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对缺血性心功能不全兔心功能血管新生影响.pdf

目 录 8㈣47㈣1洲60 0Ym㈧2㈣7 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………4 英文缩写………………………………………………………………………9 研究论文经Bcl-2基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对缺血性心功能不 全兔心功能及血管新生的影响 —12．—j一 日cj舌………………………………………………………………………10 材料与方法………………………………………………………………10 多口7K…………………………………………………………………．．．．．．1X 结果……………………………………………………………………18 附图………………………………………………………………．22 附表………………………………………………………………………30 讨论………………………………………………………………………3l 结论………………………………………………………………………34 参考文献…………………………………………………………………34 综述基因修饰干细胞治疗心肌梗死：临床前和临床应用中的相关 问题……………………………………………………………………37 致谢……………………………………………………………………………………………．．48 个人简历………………………………………………………………………49 万方数据 中文摘要 经Bcl．2基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对缺血性心功能不全 兔心功能及血管新生的影响 摘 要 目的：本实验旨在观察经抗凋亡基因(Bcl．2)修饰的骨髓间充质干 细胞(BMSCs)移植对缺血性心功能不全家兔心肌细胞调亡、血管新生 及心功能的影响，并探讨其可能机制。 的兔骨髓液，在体外经密度梯度离心+贴壁培养法，获取足量、纯化的 上切下，并与pak，，匕：．n 腺病毒载体质粒。用重组质粒共转染293细胞，收集j：j毒并大量扩上曾，经 反复冻融后置于一80℃保存待用。转染细胞前，将重组腺炳三一寰之碉准、复 苏并进行滴度测定。细胞转染：选取生长状态良好的BMSCs，采用含有 染上述细胞。模型制备及细胞移植：将28只新西兰兔随机分为以下3组： 动脉前降支制作心肌梗死模型。2周后经心脏超声筛查，将造模成功(心 功能不全标准为：LVEF50％)的各组家兔于心肌梗死边缘区分别注射等 胞移植后4周再次经超声测定心功能：左室射血分数(L、呢F)、左室短轴 切取正常及梗死边缘区心肌组织，制作石蜡及冰冻切片，荧光显微镜下观 察移植细胞的存活及分布；采用苏木精一伊红(H．E)染色法评估心肌病理 学改变；原位缺口末端标记法(TLrNEL)检测心肌凋亡细胞数并计算凋亡 率：免疫组化染色检测CD31的表达，计算新生毛细血管密度；RT-PCR 检测血管内皮生长因子(ⅦGF)基因表达。并分别与心功能(L、但F)进 行相关性分析。 万方数据 中文摘要 结果： 1 可见乳白色絮状物层，经反复换液及贴壁培养后获得纯化的BMSCs，24． 胞间形成突起，胞核居中，细胞排列疏松，18．21d可见形态规则的单层融 合束状贴壁细胞，排列紧密呈漩涡状、放射状。经胰蛋白酶消化融合的 融合。传至第10代时细胞生长速度逐渐减慢； 2本实验成功构建出大量重组腺病毒载体，冻存的病毒液经连续梯度 稀释后分别感染293细胞，经观察细胞病变率，计算病毒最终滴度(T) 为2．5×1010PFU／ml； 3转染后细胞状态：选用生长状态良好的第九代BMSCs经?志毒擎 时转染效率最佳。 4换型建立及动物存活情况：28只新西兰兔接受造模手术，术后共 组