急性早幼粒细胞白血病膜联蛋白Ⅱ的表达与临床意义.pdf

急性早幼粒细胞白血病膜联蛋白n的表达及其临床意义 摘要 摘 要 出血是急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic 著的临床特征。在应用维甲酸及其衍生物诱导治疗APL时期，该病的无病生存率 和总体生存率得到了显著改善，然而出血尤其是致死性重要脏器出血仍是该病患 者早期死亡的主要原因。APL出血的机制复杂，近年研究认为，除了弥散性血管 intravascular 内凝血((disseminated 细胞自身表达、分泌的促纤溶蛋白引起的原发怔纤溶亢进及蛋白裂解作用也是导 致APL出血的重要因素。深入探讨导致APL原发性纤溶亢进的潜在机制将会为临 床治疗提供可靠的理论依据。 II，Ann 膜联蛋白II(AnnexinII)属于钙依赖性磷脂结合蛋白超家族，是组织 型纤溶酶原激活剂(tissue type plasminogen 介导t-PA催化的纤溶酶生成；AnnII广泛表达于机体多种细胞，包括肿瘤细胞、 内皮细胞等。研究表明，APL细胞表面高表达AnnII，APL细胞较其他低表达Ann II的细胞能够更强的促进依赖t．PA的纤溶酶生成。这提示高表达AnnII可能是APL 细胞促纤溶活性增强的一个重要因素，而AnnII的表达是否与APL患者体内纤溶 活性相关未见报道。 向成熟分化或者凋亡最终使该病达到缓解，临床上使用这两种药物后患者的出血 症状迅速得到改善。ATRA或ATO减轻APL出血的作用机制一直是人们研究的热 和癌性促凝物质的表达，抑制其促凝活性，降低了DIC和出血的发生率。近几年 体外试验结果表明，ATRA和ATO与APL细胞作用后，APL细胞AnnII的表达 下降，同时其促纤溶酶生成的能力也明显降低。这些结果提示诱导治疗可通过纠 正APL细胞的促纤溶活性降低患者出血发生率。然而ATRA和ATO是否在体内具 有同样的作用未见报道。 本文选择初治APL36例，留取治疗前骨髓细胞，分别用流式细胞术和western 摘要 急性早幼粒细胞白血病膜联蛋白¨的表达及其临床意义 time．PCR检钡3JAPL细胞Ann II蛋白的表达，real II的mRNA blotting检测APL细胞Ann 含量；发色底物法检测细胞的促纤溶活性，并与其他类型急性白血病64例比较， 分析APL细胞促纤溶活性的改变及与AnnII的表达有无关联。结果发现：①所有急 性髓系白血病细胞均可检测到A衄II抗原的表达，其中急性单核细胞白血病(M5) fluorescence 与APL细胞的表达最高，平均荧光强度(mean intensity，MFI)分别为 9．93士2．23(n_12)及9．79士2．44(n_12)，二者之间无统计学差异；AML．Ml、M2、 M4细胞表面AnnII的表达较低，平均荧光强度分别为：3．19士0．56(n_lO)、 II的表达 0．5士0．26(n=l1)。Westem 约为36Kd的特异性条带，其灰度明显强于其他白血病细胞裂解液上样区。②发色 底物法检测上述不同类型急性白血病细胞的促纤溶活性，APL细胞和M5细胞促进 抗AnnII的单克隆抗体预先与APL细胞作用后，其促纤溶活性与和无关抗体作用后 的APL细胞相比下降了36％。这提示高表达AnnII可能是导致细胞膜表面纤溶酶生 成增多的重要原因。 为了进一步证实Annii在APL细胞促纤溶活性中的重要作用，我们构建了 Ann 取的总RNA逆转的cDNA为模板，用PCR的方法扩增包含AnnII开放阅读框全 II真核表达载体后， 真核