免疫毒素IL-18-PE38融合基因重组载体构建与在疾病治疗中的初步应用.pdfVIP

免疫毒素IL．18．PE38融合基因重组载体 构建及其在疾病治疗中的初步应用 摘要 目的： 构建免疫毒素IL．18．PE38融合基因真核表达重组载体，并研究该重 组质粒对IL．18受体超表达的白血病及类风湿性关节炎是否有治疗作用。 方法与结果： 接，转化感受态菌，挑取单克隆培养并提取质粒，EcoRI单酶切后 长度约为6．8kb。DNA测序结果显示IL-18和PE38序列与基因文 库中报道序列相符。 (2)脂质体转染法将构建的真核表达质粒转染入3T3细胞，荧光免疫 细胞化学法荧光显微镜照片显示转染融合基因组荧光表达强，空载 体对照组荧光表达微弱。转染之m细胞用Zeocin筛选纯系转染 阳性细胞，筛选50天后，空白组细胞死亡，对照组与转染组存活 细胞成克隆性生长。采用斑点ELLsA和Western-blot法鉴定细胞 培养上清，证实细胞培养上清中有融合蛋白表达。将上清作用于白 血病L615细胞株，MTT法测定细胞生长情况，结果显示转染重组 基因组细胞死亡率高于转染空载体对照组。流式细胞术检测结果示 转染重组基因组可见明显凋亡峰。AO／EB荧光双染色荧光显微镜 照片显示转染组较对照组呈现明显凋亡细胞染色特征。 (3)小鼠原代软骨细胞培养，采用II型胶原免疫细胞化学染色鉴定， 结果显示胞浆阳性。脂质体转染法将构建的真核表达质粒转染入小 鼠软骨细胞中，分别设置空载体对照，通过荧光免疫细胞化学法鉴 定，荧光显微镜照片显示转染融合基因组荧光表达强，空载体对照 组荧光表达微弱。 结论： (1)重组毒素IL_i8一PE38融合基因真核表达载体构建成功。 (2)重组毒素IL-18．PE38融合基因在NIHm细胞中成功表达，并可 分泌蛋白出胞外，且此融合毒素对L615细胞有促凋亡作用。提示 此重组免疫毒索可望在白血病治疗中发挥作用。 (3)成功建立原代小鼠软骨细胞系。重组毒素IL-18_-PE38融合基因真 核表达载体在小鼠软骨细胞中成功表达。提示此重组免疫毒素在 类风湿性关节炎中可望有治疗前景。 关键词：IL-18-PE38融合基因，真核表达载体，白血病，类风湿性关节 炎，凋亡 2 Constructionof interleukin--18·-PE38 fusion geneeukaryotic vector andthe ofit expression primary disorders studyagainst Abstract objectives： Toconstmct vectorofrecombinate eukaryoticexpression immtmotoxin IL一18-PE38fusion evaluate of gene，and therapeuticefficacy this ILl8-PE38fusion forleukemia and arthritiswhich protein rheymetoid IL-18 overexpressreceptor． MethodsandRes