稻瘟病菌对三个水稻品种无毒性的遗传分析及其分子标记.pdfVIP

中文摘要 建立良好的稻瘟病菌的有性杂交体系和优化培养条件是进行无毒性遗传分析的前提。 本研究首先选用自然成熟的番茄榨汁和燕麦片作为培养基的主要组分，通过调节培养基pH 值在5．5左右并添加o．1％CaCO，途径优化了稻瘟病菌有性世代形成的条件。显著增加了稻 瘟病菌子囊壳形成的数量和子囊孢子的成活率。观察发现，虽然不同杂交组合间有一定差 异，分离稻瘟病菌子囊孢子的适宜时期，一般在子囊壳开始出现后7～18天之间：在此期 间分离出的子囊孢子成活率最高可达85．5％。此外，还建立了一种分离单子囊孢子的简便 易行方法。 本研究组建了稻瘟病菌的9个有性杂交组合，从中共分离出500多个子囊孢子菌株， ， 分别测定了它们在相应水稻品种梅雨明、石狩白毛和爱知旭上的无毒性分离情况。f对亲本 ■ )(Z1-6和Z1．1 7_A7xZ28)等组合后代在水稻品种梅雨明上的无毒性遗传分析发现，凡是无毒菌株与毒性 菌株问杂交的后代在水稻品种梅雨明上的无毒性与毒性菌株分离比例为1：l，而毒性菌株 与毒性菌株间杂交后代在梅雨明上均表现为毒性。结果表明：菌株S1522对水稻品种梅雨 xSl528后代在 明的无毒性是由一个无毒基因控制的，命名为AVR-Pik。。对亲本组合P131 水稻品种石狩白毛和爱知旭上的无毒性遗传分析结果显示：杂交后代在这2个水稻品种上 的无毒性与毒性菌株分离比例均为l：1，菌株P131对水稻品种石狩白毛和爱知旭的无毒 性分别由一个单基因控制，分别命名为AVR-Pii和一髓-P蛔。、、J。 l 厂 1314bp。根据标记之一OPl077∞的宏苷酸序列设计合成了一对21个核苷酸的特异引物，对 组合P131xSl528的98个子囊孢子后代菌株进行了PCR扩增，除6个重组体外·凡是无 毒菌株均能扩增出一条700bp的DNA条带，与原RAPD标记的大小相同．而毒性菌株则 I 对组合P13l×S1528的56个子囊孢子后代菌株进行了扩增，除3个重组体外。无毒菌株能 够扩增出一条1314bp的DNA多态性条带，而毒性菌株没有此条带的扩增。二个标记 在所筛选的近500个随机引物中，没有发现与无毒基因AVR．Pia连锁的明显标记。／、 本研究还克隆了一个与无毒基 囊孢子后代菌株进行JPCR扩增，除2个重组体外，凡是无毒菌株都能扩增出一条1406bp的 DNA条带，而毒性菌株无此条带的扩增，表明已经将此RAPD标记成功转化为SCAR标记。 同时还用已有的另一对SCARgI物SC012对这108个子囊孢子后代菌株进行了扩增，除5个重 组体外，无毒菌株能够扩增出一条946bp的DNA条带，毒性菌株不能扩增出这一条带。确定 。 4．86cM，它们位于目标基因的同一侧。f 关键词：稻瘟病菌：无毒基因；分子标记；品种特异性：遗传分析 fI ABSTRACT Constructionofthe favorablecross and conditionisthe for system incubating precondition geneticanalysis avirulencein fur ofgenesconferring grisea．At