癫痫反复发作、脑损伤以及其卡马西平对大鼠脑内P糖蛋白表达及其调节的影响.pdf

中文摘要 癫痫反复发作、脑损伤以及卡马西平对大鼠脑内P一 糖蛋白表达及调节的影响 摘 要 目的：尽管不断有新的抗癫痫药物(antiepileptic 临床，但是仍有近30％的癫痫患者不能控制发作而成为难治性癫痫，其 主要的临床特征是同时对多种结构和作用机制完全不同的AEDs均产生 耐药，即多药耐药(multipledrug 药机制是一种非特异性机制。第一个被发现与肿瘤MDR形成机制有关的 受肿瘤非特异性MDR机制的启示，1995年首次发现临床难治性癫痫患者 手术切除的病变脑组织存在P—gp的过表达，并在多种急、J慢性癫痫动物 模型中得到证实，但是目前对难治性癫痫患者P．gp过表达的机制了解较 少。部分来自临床流行病学的资料显示，癫痫的反复发作、脑损伤以及 三种最重要因素。然而，上述三种因素在对P．gp的表达影响中哪种因素 处于主要地位、是否同时发挥作用、三种因素间的相互关系如何、参与 P．gp表达的调节因素有哪些以及P。gp的亚细胞定位等，目前都还缺乏了 解。 PTZ)点燃模型、大脑中动脉永久阻塞(Middle 干预三种模型，研究上述三种因素对P—gp表达的影响及相互关系；确定 inducib】e P—gp的表达部位及其功能联系；分析低氧诱导因子．1Ⅸ(Hypoxia 床用药和寻求通过阻断胱打J基因编码蛋白一P．gp的高表达以减少抗癫 痫药物耐药性形成、提高药物疗效以及开发新型AEDs提供第一手的实 验资料和理论依据。 方法： 16只，随机分为3组：PTZ 1实验动物及分组：健康雌性SD大鼠l 中文摘要 应用组(22只)。 2模型制备： 2．1PTZ点燃模型组：随机分为对照组(6只)和实验组(36只)。实 验组分2h、4h、12h、24h、48h、1w组，每组6只；腹腔注射戊四氮40 mg／l(g， 每日2次。对照组同时注射等剂量的生理盐水。给药后观察30～60min。， 行为学判断标准按照Smialowki6级记分法。点燃成功标准：给药后连续 出现3次Ⅳ级或V级发作。 2．2MCAO模型组：随机分为3组：对照组(5只)、假手术组(5只) 72h组，每组各7只。采用线栓法制作MCA0模型；假手术组，除不插 线外，其余操作相同；对照组不做任何处置。模型完成2h后参考Longa 和Bederson的5分制评分方法进行神经功能缺失体征评分。模型成功标 准：术后评分之1分。 2．3CBZ干预组：随机分为对照组(4只)和实验组(18只)。实验 ×鼠体重(埏)×6．25(由体表面积换算得到)。给药方法：每日一次，早 8：oo～10：oo灌胃给药；对照组同时给予等量的生理盐水。并分别选取2w 和4w组各4只，荧光偏振检测法测定血药浓度的谷浓度。 3．P。gp和mF一1伐检钡0： 所有实验动物均在相应的时间点灌杀、取脑组织、切片，免疫组织化 0c的表达情况，并分别和神经元的特异性标记 学SP法检测P．gp和ⅢF．1 行双重标记染色，确定二者的表达部位。 4．统计学方法： 同一组不同时间点行单因素方差分析。 结果： 1．行为学表现： 1．1PTZ点燃模型组：动物除2只死于癫痫持续状态外，其余动物均 全部点燃，点燃成功率95％。对照组无癫痫发作。 1．2大脑中动脉阻塞模型组：动物24h和48h组，分别有2只和4只 中文摘要 死亡。模型成功率为80％。假手术组和对照组无行为异常表现。 1．3 表现。 2．P．gp和HIF一1仅的表达和分布： 2．1对照组：二者零星分布于血管内皮细胞，并和特异性内皮细胞标 记物一ECA进行免疫组织化学双标证实；脑实质细胞上未见表达。