章培养基成分和作用.pptVIP

第四节 其他添加物 1，培养基固化剂 1）琼脂（agar） 固化剂中使用最多的是琼脂，又名琼胶、洋菜、冻粉，是一类从石花菜及其它红藻类植物提取出来的藻胶。条状琼脂为类白色或淡黄色半透明细长条状；粉状琼脂为鳞片状无色或淡黄色粉末。 琼脂是多糖类物质，使用浓度为0.6-1%。现在还没有看到植物组织能吸收利用琼脂的报导。但琼脂里混杂的物质常常对培养结果产生比较明显的影响。 第四节 其他添加物 1，培养基固化剂 1）琼脂（agar） 琼脂溶液（培养基）一般在45摄氏度前后逐渐凝固，浓度是影响凝固温度的一个因子。如果培养基灭菌后没有混匀，容器底部的浓度偏高，容易在底部开始凝固。 附：琼脂糖(agarose)，在多数情况下的培养效果比琼脂好，特别是低凝固温度的琼脂糖是原生质体包埋培养的首选材料。 第四节 其他添加物 1，固化剂 2）卡拉胶（carrageenan ） 卡拉胶是另一种在组织培养生产上用得最广泛的固化剂，使用浓度为0.6-0.8%，价格为琼脂的1/2-1/3。 卡拉胶是从红藻中的几个海藻品种中提取的海藻多糖的统称。不同的来源有不同的精细结构，其胶体性质也不尽相同。 第四节 其他添加物 1，固化剂 2）卡拉胶 卡拉胶干的粉末性质很稳定，长期放置不会降解，在中性和碱性溶液中也很稳定，即使加热也不水解。植物细胞不能分解或吸收卡拉胶。 卡拉胶在培养效果上和琼脂往往有区别，使用琼脂的培养效果往往较好，例如有利于避免植物材料的玻璃化。 第四节 其他添加物 1,固化剂 3)Phytagel(植物胶) Phytagel是一种纯度高、透明度好，凝胶强度大的固化剂。使用浓度为1.5-2g/L,仅为琼脂的1/4到1/5的用量。 Phytagel由细菌所产生,主要成分为葡糖甙酸,鼠李糖和极少量的葡萄糖。 Phytagel需要一定浓度的钙离子才能够凝固，在培养水稻植株的后期本来已经固化的培养基会变软甚至液化。 第四节 其他添加物 1,固化剂 4)冷凝胶 固化质量类似优质琼脂，但透明度比琼脂高，并且粘度比琼脂小。因此特别适合组培苗最后一个阶段——诱导芽条长根的培养。因为组培苗出瓶后需要洗干净根上的培养基才能种植。 第四节 其他添加物 1,固化剂 5) 其他 淀粉也可作为培养基的固化剂，但物理性能很差，粘性大，操作不方便。有些植物种类或器官能在一定程度上利用培养基中的淀粉。 热稳定和化学惰性的物质，这类物质很多，但在组织培养中应用不常见，主要是起到物理性质的支撑作用。 有四个因素会影响培养基的固化强度：固化剂的量，培养基酸碱度，高压灭菌的温度和时间长度，培养基成分特别是重金属离子浓度。 固化剂一定要在溶解状态时搅拌混匀，不然会沉淀而造成培养基上层偏软。 第四节 其他添加物 2，酸碱度调节剂和稳定剂 一般培养基酸碱度在调配后偏于酸性，pH值在5.0前后，培养基在高压灭菌后pH值还会继续降低。 太低的pH值不仅不适合植物细胞的生长，而且，还会明显降低培养基的凝胶强度，或导致培养基完全不能凝固。 高压灭菌之前将培养基的pH值适当调高，一般是采用1N的NaOH或KOH溶液将酸碱度调至pH值等于5.6-5.8。 第四节 其他添加物 2，酸碱度调节剂和稳定剂 很多缓冲剂由于对植物细胞具有毒害作用而不能够在培养基中使用；实际上能够用于稳定培养基酸碱度的只有MES（吗啉代乙基磺酸），一般使用量在500mg/l左右。 由于MES自身是酸性物质，增加添加量会导致培养基太酸而不适合细胞生长，因此，不能够通过增加使用量来提高缓冲能力。 第四节 其他添加物 3，渗透压（osmotic potential）调节剂 在某些特殊情况下需要对培养基的渗透压进行调节。 培养基的成分决定了渗透压的具体数值，对渗透压的调节需要改变培养基的成分。 渗透压调节剂一般采用植物不能进行代谢的物质，用的最多的是甘露醇(mannitol)和山梨醇(sorbitol)。 实际上，某些植物是能够代谢山梨醇的。 对渗透压的改变量和调节剂的分子量成反比。 第四节 其他添加物 4，吸附剂(absorbance) 吸附剂的作用是吸收植物组织分泌到培养基中的有害物质，保护植物组织免受毒害，防止组织褐化（browning, necrosis）。 1),活性炭(activated charcoal, AC) 活性炭是一种多孔性的微粒，主要是利用物理性的吸附作用。加到培养基后可以和外渗物结合，减少外渗物对组织的毒害作用。但活性炭也会吸收植物生长调节剂，从另一个方面对组织培养造成影响。 第四节 其他添加物 4，吸附剂(absorbance) 2), 聚乙烯吡咯烷酮（