四酶的生产.pptVIP

第四节　酶的生产 一、酶的生产方法 二、酶的发酵生产 三、发酵工艺条件及控制 一、　酶的生产方法 1、提取分离法 采用各种提取、分离、纯化技术从动、植物或微生物细胞中提取酶的方法 工业提取法：酶纯度不高，常采用过滤、离心、浓缩、沉淀等方法。 菠萝蛋白酶的提取： 菠萝下脚料压榨→汁液，澄清→澄清液，超滤浓缩→浓缩液，有机溶剂沉淀→湿酶，干燥→酶制剂 生化研究用酶纯度要求高，还须采用精制技术。 2、生物合成法 在人工控制条件的生物反应器中，通过微生物细胞、植物或动物细胞的生命活动合成所需酶的技术过程，现成为酶的主要生产方法。 通过微生物细胞生命活动合成所需酶的方法又称发酵法。 微生物发酵生产酶的优点 ①种类繁多 ②繁殖快, 周期短 ③培养基来源广, 价格便宜 ④便于生产自动化 ⑤可改造育种 发酵方法 固体发酵 液体深层发酵 发酵法 固定化细胞发酵 固定化原生质体发酵 3、化学合成法 在1964年前，我国就首先合成胰岛素。 1969年又合成了核糖核酸酶。 合成过程复杂，成本高，难以工业化。 二　酶的发酵生产 1．常用的产酶微生物 酶发酵生产的细胞必需具备如下条件 ①酶的产量高； ②产酶稳定性好； ③容易培养和管理；发酵周期短，营养需求简单； ④产物杂质少，利于酶的分离纯化； ⑤安全可靠，非致病性。 工业规模应用的微生物酶和它们的某些来源 2.产酶菌的筛选 2.1菌样的采集(富集) 2.2 菌种的分离纯化 平板划线法; 直接稀释法 2.3菌种生产性能的检定 初筛: 从分离出来的菌种中挑出目的菌株. 复筛: 在初筛基础上筛选产酶量高,性能更符合要求的菌株 保藏中心 / Helicobacter Pylori 3 产酶菌的培养 ①固体培养 浅盘培养, 转鼓培养, 通风式厚层培养 ②液体深层通风发酵 优点：①产酶纯度高，质量稳定； ②较易控制发酵条件，有利于自动化控制； ③机械化程度高，劳动强度小；设备利用率高。 缺点：设备投资较大 4 培养基 培养基：人工配制的用于细胞培养和发酵的各种营养物质 的混合物。 a. 培养基设计考虑：①菌种特性 ②不同培养阶段 ③产物 ④原料来源难易。 b. 培养基的种类： ①营养物质来源不同：天然、合成、半合成 ②物理状态不同：液体、固体、半固体 ③功能用途不同：基础、加富、选择、鉴别 c. 培养基的营养成分 1 )碳源： 角色：①能量； ②细胞和各种代谢产物的碳架 种类：淀粉及其水解物（主要），烷烃、甲醇 2) 氮源： 角色：蛋白质（包括酶）和核酸的主要元素。 种类：无机氮，有机氮 3) 无机盐 角色：蛋白质（包括酶）和核酸的主要元素（参与细胞的组成，细胞能量代谢，调节细胞膜的透性，酶的激活剂），并对培养基的pH，氧还电位，渗透压起调节作用。 主要元素：磷、硫、钾、镁、钙、钠 微量元素：铁、铜、锌、锰、钴 磷，特别重要的元素 作用： 构成核酸和磷脂的成分； 参与所有的能量转移过程（ATP，GTP）； 许多酶的组成成分。 常用的补磷剂：KH2PO4，K2HPO4，Na2HPO4，(NH4)2HPO4，H3PO4 微量元素 有的是某些酶组成成分， 有的是酶的激活剂， 有的是辅酶的必须成分。 天然原料中常已存在，一般无须另外加入。 4) 生长因子 定义：细胞生长繁殖不可缺少的微量有机化合物，如aa, Vit, 嘌呤，嘧啶，激素 提供生长素的天然原料：玉米浆，麦芽汁，酵母膏等。 5) 产酶促进剂 定义：能显著增加酶产量的某种少量物质，主要为酶的诱导物或表面活性剂。 表面活性剂：①提高膜的通透性 ②对酶的失活有保护作用 ③消泡以提高氧传递系数 三 发酵工艺条件及控制 1、PH值 1 .1与细胞的生长繁殖以及发酵产酶有密切关系。 ①影响微生物体内各种酶的活性，从而导致微生物的代谢途径发生改变； ②影响微生物形态和细胞膜的透性，从而影响微生物对培养基中的营养成分的吸收和代谢产物的分泌。 ③影响培养基中某些营养物质的分解或中间代谢产物的解离，从