法夫酵母JMUMVP14联产发酵虾青素及其低聚果糖研究.pdf

法夫酵母JMU-MVP14 联产发酵虾青素及低聚果糖的研究 摘 要 法夫酵母是天然虾青素的重要来源。利用法夫酵母生产虾青素具有生长快、易培养等 优点。此外，法夫酵母还具有β-果糖基转移酶活性，可以合成功能性低聚果糖。在发酵虾 青素的同时兼顾低聚果糖的合成可进一步提高法夫酵母的产业价值。因此，研究虾青素和 低聚果糖的联产发酵技术具有重要意义。 本论文研究高产虾青素的法夫酵母--JMU-MVP14 菌株的低聚果糖成分及合成规律、优 化其合成的基本条件，探索虾青素和低聚果糖联产发酵技术及低聚果糖提纯的技术，为该 法夫酵母菌株的进一步开发利用提供研究基础。主要试验结果如下： （1）优化了测定法夫酵母JMU-MVP14 发酵液中糖类成分的液相色谱（HPLC ）条件， 确定其等度洗脱的流动相组成为78% 的乙腈和22% 的水； （2 ）通过液质联用分析（HPLC-MS ）及糖类标准品保留时间的对照分析，确定法夫 酵母JMU-MVP14 发酵液中的糖组分分别是果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、新科斯糖以及 蔗果三糖，其中新科斯糖和蔗果三糖是功能性低聚果糖。 （3 ）法夫酵母 JMU-MVP14 利用蔗糖合成低聚果糖，其催化蔗糖合成低聚果糖的酶 （β-果糖基转移酶）是组成型酶；不仅法夫酵母JMU-MVP14 细胞能催化蔗糖转化成低聚 果糖，其发酵上清液也具有转化蔗糖的能力。 （4 ）蔗糖浓度及补加蔗糖后的发酵温度是影响虾青素和低聚果糖联产发酵的主要因 素，通过最速上升试验、中心组合试验优化得到虾青素发酵末期合成低聚果糖的最优蔗糖 浓度为236.18 g/L 、发酵温度为34.55℃。 （5 ）在7 L 罐中采用分段发酵工艺培养法夫酵母JMU-MVP14 ，第一阶段采用葡萄糖 流加技术提高虾青素的产量，第二阶段在虾青素合成末期补加蔗糖合成低聚果糖（新科斯 糖和蔗果三糖）；不仅高产虾青素，还可合成新科斯糖和蔗果三糖；在优化的工艺条件下 （蔗糖浓度为236.18 g/L 、发酵温度为34.55℃）联产发酵虾青素和低聚果糖，虾青素的最 大产量达到194.08 mg/L，低聚果糖的最大产量达到40.88 g/L 。 （6 ）用离子交换树脂、硅藻土、活性炭等为吸附剂对法夫酵母 JMU-MVP14 发酵液 中的低聚果糖进行分离试验发现，用活性炭作为吸附剂，在35℃的条件下用乙醇分步洗脱， 可实现低聚果糖的有效分离，其纯化产物中糖的含量达到97.65%，铅为0.053 mg/kg ，镉 为0.003 mg/kg ，砷为0.054 mg/kg ，铬为0.433 mg/kg ，灰分含量低于0.8% 。 本论文证明了法夫酵母JMU-MVP14 不仅高产虾青素，而且在实现虾青素高产的同时 还可发酵获得低聚果糖；，为进一步优化工艺，实现虾青素和低聚果糖的联产发酵提供了 研究基础。 I 关键词 法夫酵母，虾青素，低聚果糖，联产发酵，分离纯化 II Simultaneous production of astaxanthin and fructooligosaccharide by Phaffia rhodozyma JMU-MVP14 strain Abstract Phaffia rhodozyma which is considered as one of the most important sources of nature astaxathin is easly to culture and grow fastly in many media. In addition, Phaffia rhodozyma was revealed to synthesize functional fructooligosac