盐酸克伦特罗单抗制备与免疫诊断试剂应用及研究.pdfVIP

■—■——■■●—■■——皇鲁詈量皇皇■■■■■●—■■■■●■■—■■■■■—鼍●——■—■■—■———皇暑暑鲁詈詈量—■—■■■—■—■———■■——■■—■■一 一 l l I 1 III I I ill U I I I IIII一 ·————·————皇=—t·—-·--·———-——-—··--———e』塑量三———————--—-——一Illl 1112 。{Y205 摘要 盐酸克伦特罗是一种f12．肾上腺受体激动剂，畜禽食用后，可以显著提高其生长速 率，使瘦肉相对增加。但易在动物体内沉淀，人食用含有该药残留的动物产品后，可引 起食物中毒，严重者导致死亡。为此，盐酸克伦特罗被禁止在食品生产中应用，为了严 格监督控制盐酸克伦特罗的滥用，各国出台了相关的法律法规，研究者开发了多种检测 方法。本试验围绕盐酸克伦特罗单克隆抗体的研制开展了四个层次的研究工作，对免疫 学检测方法做了基础性研究。试验内容和结果如下： (1)盐酸克伦特罗完全抗原的制备：利用叠氮法将CL和牛血清白蛋白BSA、及卵清白蛋 鉴定，发现偶联前后载体蛋白OVA、BSA的吸收峰发生改变，电泳结果显示偶联物的分 子量大于载体蛋白分子量。而且用CL．BSA免疫小鼠制各抗血清，用CL．OVA包被酶标 板，检测得到的抗体可以和游离的CL发生特异性的结合反应。 (2)盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备：采用B淋巴细胞杂交瘤技术，以CL．BSA为抗原免疫 中选择培养，用间接ELISA方法鉴定出阳性克隆，再用有限稀释法使阳性杂交瘤细胞进一 步克隆化筛选出阳性杂交瘤细胞株。成功筛选出7株杂交瘤细胞株 2％BSA用pH7．4 0．2ng／ml。 (4)盐酸克伦特罗胶体金免疫层析诊断方法的建立：采用免疫竞争法将抗盐酸克伦特罗单 克隆抗体．胶体金复合物包被在胶体金结合垫上。并将人工合成的盐酸克伦特罗抗原包 被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线)，人工合成的盐酸克伦特罗抗原与待测样品 中盐酸克伦特罗竞争结合胶体金标记的抗盐酸克伦特罗单克隆抗体，并能以颜色直观显 示检测结果。灵敏度最低值是0．5 ng／ml。 关键词盐酸克伦特罗：单克隆抗体；酶联免疫分析技术；胶体金 Abstract Abstract Clenbuterol the animalseated call Hydrochlodde(cL)．011@ofB-adrenergicagonists，when it，they increasethe thattherelativeincreaseinleanmeat．Butits to significantly growthrate，SO easy invivo，human ofanimal the precipitate consumptionproductscontainingdrugresidue，may to Was inf．00d leadtofood cases banned death．Therefore，CL poisoning，severeleading order ofCL