一氧化碳中毒小鼠脑内Ang-1、Ang-2与Tie-2mRNA动态变化与丁苯肽对其影响.pdf

一氧化碳中毒小鼠脑内Ang—l、Ang．2及 Tie．2 mRNA的动态变化及丁苯肽对其影响 硕士生姓名： 王晓婷 指导教师： 王苏平 教授 专业名称： 神经病学 摘 要 背景：一氧化碳(Carbonmonoxide，CO)是一种无色、无味、无臭、 无刺激性的有毒气体，是生活和生产中造成中毒性死亡最常见的窒息性 气体。它可以引起机体多个系统损伤，其中大脑损害最为严重，且有一 部分急性一氧化碳中毒患者在中毒症状缓解、意识恢复正常后，大约经 历2到60天表现正常或基本正常的间歇期后，会再次出现一系列脑病 after 的症状，称为一氧化碳中毒迟发性脑病(Delayedencephalopathy carbonmonoxide 碍、锥体外系神经障碍、锥体系神经损害等，是CO中毒最严重的类型。 有关急性CO中毒和DEACMP发病机制仍不十分清楚，迄今为止已经提出 了许多假说，如缺血缺氧、细胞毒性损伤、再灌注损伤和自由基的形成、 兴奋性氨基酸的生成、凋亡机制等。其中缺血缺氧机制在CO中毒脑损伤 的发生机理中占有重要地位。近年来，许多研究结果表明，缺血缺氧后， 缺血周围区域存在新生血管形成现象，而通过血管新生可以启动损伤区 微血管网重建，进而可以改善损伤区微循环组织的血液灌流，这对CO中 毒后缺血缺氧神经元的存活具有重要意义。目前，动物实验已证实，脑 缺血时脑内可见新生血管形成，而CO中毒后脑血管的分子生理病理变化 尚无明确报道。 重要作用，它可以特异作用于血管内皮细胞。其中家族中的Ang．1、Ang．2 与血管生成密切相关，与内皮细胞表面特异受体Tie．2酪氨酸激酶结合发 挥促血管生成作用。Ang／Tie．2系统参与血管新生的最后阶段，通过干预 内皮细胞、平滑肌细胞和周细胞的相互作用促进血管生成和重塑，在缺 血等病理状态下可作为一种关键的血管生成调节剂。然而CO中毒后脑组 织内Ang-l、Ang．2及Tie．2的表达变化无相关报道。 丁苯肽是临床应用于治疗急性脑卒中的一类化学新药，可促进新生 血管生成，恢复脑血流的供应，增加缺血区脑血流量和改善脑缺血区微 循环，保护线粒体功能，改善全脑缺血后的能量代谢等，涉及脑缺血病 理的多个环节，但其对治疗和改善急性CO中毒损伤的分子机制尚不很明 确。 目的：本实验拟在建立CO中毒小鼠模型的基础上，从mRNA水平 动态观察小鼠海马区Ang．1、Ang．2及Tie．2表达的变化规律，探讨CO中毒 对小鼠脑内血管内皮系统的影响，以期能够推测新血管形成机制在脑损 伤发生后的作用，并进一步在分子水平研究CO中毒后丁苯肽对血管生成 素系统的影响。 实验方法：健康雄性小鼠144只，体重(1 8．22)g，随机分成空气对 4d、21 为6h、ld、2d、3d、4d、7d、1d、28d，8个亚组。染毒组按照单 次腹腔注射法建立CO中毒小鼠模型，空气对照组以等量空气腹腔注射， 染毒后丁苯肽组给予丁苯肽(1ml／kg，bid)腹腔注射。相应时间点，处死 小鼠，断头取脑，研磨脑组织，提总RNA。采用逆转录．聚合酶链反应 mRNA水平表达变化。 (RT-PCR)技术检测各组Ang．1、Ang．2及Tie．2 l 数据以均数士标准差表示，统计学处理采用SPSS 6．0软件进行One．Way ANOVA检验。 结果： mRNA表达呈双峰性增高。 1、CO中毒后，Ang．1、Ang．2和Tie．2 mRNA