一氧化氮对臂丛神经根损伤大鼠脊髓功能影响.pdf

中山大学硕士论文 一氧化氮对臂丛神经根损伤人鼠脊髓功能的影响 一氧化氮对臂丛神经根损伤大鼠脊髓 功能的影响 学科专业： 人体解剖与组织胚胎学 学位申请人： 王亚琼 导 师： 周丽华教授 中文摘要 目的：根性撕脱伤是臂丛损伤中最严重的一种创伤，常见于交通事故及新生儿产 伤合并症。神经根撕脱后会导致损伤侧所支配的肌肉群瘫痪及严重的感觉功能障 碍。神经根丝从脊髓离断会导致相应脊髓节段前角运动神经元大量死亡，因此现 阶段研究主要集中在如何保护运动神经元。研究发现，撕脱伤诱导的运动神经元 oxide 死亡与一氧化氮合酶(nitricsynthase，NOS)尤其是神经元型一氧化氮合酶 nitricoxide (neuronal 扮演的角色存在争议，一些研究认为nNOS可能具有神经毒性作用，因为nNOS 的表达总是伴随着氧化应激的产生。但我们前期研究发现应用植物抗氧化剂对运 动神经元的长期存活却没有很大帮助，最近我们又发现撕脱伤早期，损侧脊髓组 织nNOS基因的整体表达水平是下降的，由此我们推测：损伤早期NO可能有保 护运动神经元的作用。为证实这个假设，本实验在神经根撕脱伤早期应用外源性 一氧化氮供体硝普钠(sodium nitricoxide acidic iNOS(induciblesymhaLse，iNOS)、Nestin、GFAP(glialfibrillary 迸一步探讨nNOS／NO在根性撕脱伤中的作用机制。 中山大学硕士论文 一氧化氮对臂丛神经根损伤大鼠脊髓功能的影响 取C7节段脊髓制作冰冻切片，应用免疫组织化学以及酶组织化学、中性红染色 等方法，定量存活运动神经元数以及nNOS、c．Jun蛋白在运动神经元的表达情 数据均记为均数4-标准差(x±s)，以中山大学统计学教研室提供的SPSS软件分析 上述各指标的组间差异，分析c．Jun或nNOS表达程度与运动神经元存活的相关 关系。以期明确NO／nNOS在臂丛根性撕脱伤中的作用地位和相关机制。P郢．05 被认为有统计学意义。 结果：(￡)SNP40mM以上剂量局部应用局部会导致动物立刻死亡，臂丛撕脱术后 均能降低运动神经元的nNOS阳性率；运动神经元存活率(％)为：NS组为 因此我们选择了5mM做为最终SNP浓度。②SNP加剧根性撕脱伤引起的患肢的疼 痛反应，使得热刺激撤足潜伏期(s)6d时间点大鼠右侧前肢从正常组的17．47a：2．36， 非常显著性意义。③sNP减少撕脱伤脊髓运动神经元的存活率(％)：6d时间点两 nNOS阳性神经元的分布一致，损伤侧前角nNOS阳性运动神经元阳性率(％)：6d 时间点SNP组(20．78：1：2．36)比NS组(11．54士4．85)显著增多；15d时间点SNP组 组(52．82士5．23)显著低于NS组(66．8 1：t：5．25)；存活相关分析显示：两个时间点无论 是运动神经元nNOS阳性率或存活运动神经元nNOS阳性率都与存活运动神经元 n 中山大学硕士论文 一氧化氮对臂丛神经根损伤大鼠脊髓功能的影响 显示：两个时间点的c．Jun阳性神经元的数目与存活运动神经元数目之间相关性 均没有统计学意义(p均O．05)；但是综合两时问点数据进行相关性分析，c．Jun阳 性神经元的数目与运动神经元存活数目之间存在显著正相关(FO．633，p0．01)。 (DiNOS免疫组化显示15d时NS组撕脱侧胶质细胞仅部分激活，胞体变大，可见少 量粗短突起；SNP组胶质细胞数量明显增多，胞体肥大，分枝状突起变短甚至消 失。撕脱侧背角浅层iNOS表达明显增强。15d时损伤侧iNOS单位面积的平均灰度 义，p均o．01。⑦撕脱伤引起的小胶质细胞和星形胶质细胞反应与NS组相比，均 呈过度激活状态，细胞数量明显增多，胞体变大，突起变粗变短甚至消失；Nestin 阳性胶质细胞集中分布在损伤侧前角和后角浅层，在脊髓前角围绕损伤运动神经