荧光定量PCR检测社区获得性肺炎患者痰标本中肺炎链球菌及研究.pdf

荧光定量PCR检测社区获得性肺炎患者 痰标本中肺炎链球菌的研究 硕士生姓名： 饶春梅 孑旨导教师： 张中和教授 指导小组： 季颖群教授 专业名称： 护理学 摘 要 目的背景：社区获得性肺炎(communityacquired 然是威胁人类健康的重要疾病之一。在美国CAP是第六位致死病因；在 英国CAP居死因第4位；在我国每年也有数百力．人罹患CAP。对CAP 的治疗仍以经验用药为主，但因现有的CAP病原学诊断工具在检测敏感 性和特异性方面有限，且耐药菌株增加，使首次经验用药失败率增加。 所以临床需要建立快速诊断病原体的方法以指导临床早期准确用药。肺 炎链球菌(SP)是CAP的主要致病茵。传统痰培养方法查找病原体耗费时 间长，并常常由于抗生素的应用而导致假阴性结果。虽然尿抗原检测敏 感性高但特异性仍未确定。近年来，以聚合酶链反应(PCR)法为基础的检 测方法逐步应用于多种呼吸道感染病原体的检测中，目前在传统PCR技 术基础上发展了更先进的定量PCR技术，如荧光定量PCR。荧光定量 PCR是集PCR高敏感性、DNA杂交探针的高特异性和光谱技术的高精 确定量为一体，扩增目标基因的确定可以实时出现，并且整个过程能够 在1．2小时完成。基于以上背景提出本课题，旨在探讨CAP患者痰标本 中荧光定量PCR对肺炎链球菌感染的诊断价值和临床意义。 0年1月大连医科大 对象与方法：实验组顺次选自2008年9月至20l 学附属第一医院呼吸科CAP患者，共49例；对照组选取上述相应时间 内的健康成年志愿者，共42例。实验组与对照组在性别、年龄无差异性。 留取实验组患者连续晨痰标本及对照组志愿者一次晨痰标本。实验组标 本取一部分做痰培养，另留存lml标本于无菌离心管中．80℃保存待检， 用于肺炎链球菌自溶素基因荧光定量PCR检测。对照组志愿者留取晨痰 标本lml无菌离心管中．80℃保存待检。采用定量培养的方法获得标准 07、l06、l05、1 品。制成各含SPl 04cfu／ml浓度的菌液，以此作为阳性 对照，并行荧光定量PCR，绘制标准曲线。 结果：实验组49例CAP患者共44例取得合格晨痰标本。痰培养结 果显示，耐红霉素的SP 1／44例(2．3％)、敏感的金黄色葡萄球菌1／44例 含量芝104(cfu／m1)定义为感染，共检测出l0／44例(22．7％)，其中SP起始 8．2％)。 在界定之104(cfu／m1)3勾感染的病例中，与影像学、白细胞计数及治疗反应 的对比无差异(p0．05)。在荧光定量PCR检测定义为SP感染的病例中， 9／10例(90％)传统痰培养结果为阴性。因此，上述两种检测方法在对SP 感染的检出率方面差异有统计学意义(p0．05)。对照组42例痰标本中检 测出SP感染3例(7．1％)，均为SP起始模板DNA含量芝1 04(cfu／m1)，另 8／42例(42．9％)， 未检测出SP有1 3／42例(31．O％)。实验组、对照组痰标本检测SP有感染 意义的差异有统计学意义(pO．05)。实验组共有27例获得之2次痰标本， 其中21例检测到SP，有l5／21例(7 1．4％)SP起始模板DNA含量变化呈 逐日递减的结果。 结论：荧光定量PCR作为传统检测方法的补充，对CAP患者痰标 本中肺炎链球菌的检测有更高的敏感性和特异性。 关键词：社区获得性肺炎 肺炎链球茵 痰培养 荧光定量PCR 2 The offluore