酿酒酵母Pde1细胞内定位定位调控机制及研究.pdfVIP

中文摘要 节的。但以往的研究发现：在胞外试验中，磷酸化纯化的Pdel并不能改变它对 cAMP的低亲和力性或激活其降解cAMP的活性。因此，很可能磷酸化的作用在 于使Pdel酶定位于胞内特定的位点，而cAMP趋向于在该位点被降解。本课题 的。将这些菌株在以甘油(非发酵性碳源)为碳源的合成培养基中培养至对数生 长期时，加入葡萄糖诱导细胞。通过免疫荧光检测的方法，检测细胞内Pdel-GFP 融合蛋白的细胞内定位。研究发现：生长在非发酵性碳源培养基中的菌株YNl23 和菌株YNl00其Pdel蛋白定位在细胞质内，很有可能集中在内质网或高尔基 集中于细胞质内特定的位点(内质网或高尔基体)扩散到细胞质中；而在葡萄糖 低PKA活力的细胞(细胞生长在非发酵性碳源培养基中或是胞内PKA水平组成 犁降低)中，未被磷酸化的Pdel会从细胞质中汇集到内质网或高尔基体上以防 止其降解胞内的cAMP；另一方面，在高PKA活力的细胞(细胞生长在葡萄糖 培养基中或胞内PKA水平组成型升高)中，Pdel将被磷酸化，并且定位于细胞 融合蚩白以点状散布在细胞质内。这一现象与生长在非发酵型碳源培养基中的菌 前研究成果相一致即：酵母细胞在葡萄糖上一旦开始发酵型生长，Ras—cAMP通 路便会被关闭，另一通路FGM将会取代PKA的作用去激活PKA的目标蛋白。 Sch9是目前唯一所知的FGM通路的组分，它对PKA的活力有抑制作用。因此， 葡萄糖的加入激活了FGM通路，导致PKA活力的降低，Pdel磷酸化水平下降。 研究过程中发现：在已经出芽的酿酒酵母细胞中，Pdel更加集中于芽，并且在 芽中则趋向于集中到芽生长位点的项部。这暗示：Pdel趋向于集中到细胞生长 最为旺盛的部位来调节细胞的生长或分化。 关键词：酵母；环腺苷酸：Ras．cAMP信号转导通路；信号转导；PDEJ Abstract The cerevisiaecontainstwo andPDE2．which yeastSaccharomyces genes．PDEl encodea anda cAMP low—affinity high-affinity Pdelin a fianctioninthefeedback low-affinityenzyme yeast．hasspecific controlof the cAMP its PKA．Previous glucose—inducedsignalinguponphosphorylationby researchhasfound thatinvitro ofPurifiedPdeldoesnot its phosphorylation change or for intrinsic cAMR ofPdelwas tobe activityaffinity Phosphorylationsuggested invivofor Pdeltoa subcellular important targeting specific locationwherecAⅣ【Pis PDEl一G即fusionwasconstructedwhichiscalledV4l degraded．A gene 0．This wastransformedintotlle andYNlol