脂解诱导巨噬细胞聚集机制和海参皂苷对其调节作用初步及研究.pdf

谨以此论文献给： 我最尊敬的导师薛长湖教授、Abumrad Nada 教授 以及关心支持我的家人 胡晓倩 万方数据 万方数据 万方数据 脂解诱导的巨噬细胞聚集机制和海参皂苷对其调节作用的初 步研究 摘要 能量摄入过度和运动相对不足导致了世界范围的肥胖现象激增，肥胖可以引发糖尿 病，心血管疾病、脂肪肝、神经退行性疾病和癌症，肥胖已成为全球范围的健康问题。近 年来研究发现，脂肪组织不仅是能量存器官，也是重要的内分泌和代谢器官，可以分泌产 生多种细胞因子，并发生巨噬细胞浸润导致炎症的发生。 机体在正常情况下，脂肪细胞的脂肪含量较少，基础脂解率也较低。在肥胖发生时， 由于脂肪组织增多，相应的基础脂解率也随之提高，释放出大量的游离脂肪酸(FFA)。当 节食或禁食状态下，由激素诱导的需求性脂解被激活，脂肪组织也会快速产生大量FFA 以满足机体能量需求。无论是肥胖引起的脂肪分解还是节食引起的脂肪分解，都同样引发 脂肪组织中巨噬细胞的聚集和增多。但是脂肪分解是如何引起巨噬细胞浸润的，其中的作 用机制尚不明确，因此本文对脂解诱导巨噬细胞聚集的机制开展了研究。结果发现脂解过 程产生的前列腺素PGE2 是诱导巨噬细胞迁移的主要作用分子，并且很有可能参与了肥胖 发生过程伴随的巨噬细胞浸润。 实验室前期研究发现，海参皂苷具有显著的改善肥胖及其相关代谢相关疾病的作用， 但是其作用机制，特别是对脂肪组织功能的影响尚不明确。海参皂苷单体echnoside A(EA) 在海参皂苷中含量较为丰富且结构明确，故本研究选用EA 为代表，考察了EA 对肥胖的 改善作用，并从影响脂肪组织内巨噬细胞浸润和环氧合酶(COX)表达等方面对其作用机制 进行了初步研究，为海参皂苷在功能食品中的应用提供科学依据。 本研究首先以成熟分化的3T3L1 脂肪细胞为体外模型，通过forskolin 处理诱导其脂 解，检测了脂解过程中游离脂肪酸、MCP-1、一氧化氮、花生四烯酸及其代谢产物前列腺 素等的变化，并通过 transwell 巨噬细胞迁移模型验证上述物质影响巨噬细胞的趋化能力， 最后确定FFA 和PGE2 通过协同作用共同诱导了脂解过程中巨噬细胞向脂肪组织的迁移， 但是PGE2 作用更强。本文对脂肪细胞前列腺素PGE2 的生成机制进行了研究，从PGE2 合 万方数据 成底物花生四烯酸的水解、再酰化，以及PGE2 合成相关酶的表达方面进行了分析，结果 发现，forskolin 诱导的脂解可以刺激胞质型磷脂酶A2 (cPLA2α) 转录表达、磷酸化，并促 进其从细胞质转位至细胞质膜；另外forskolin 对LPCAT 的基因表达无影响，表明forskolin 通过促进了cPLA2α 活力提高磷脂水解产生花生四烯酸，同时不影响LPCAT 介导的花生四 烯酸再酯化，解释了脂解引起的花生四烯酸增多的原因。另外，forskolin 诱导的脂解还刺 激了COX2 的基因表达，说明PGE2 合成的增多不单单是由于底物增多，作为PGE2 合成 关键酶的COX2 表达大幅度上调也是关键因素。 FAT/CD36是单链跨膜蛋白，不仅参与脂肪酸转运，还可调节细胞内外的信号传递过 程。前期研究表明CD36是调节脂解的重要分子，本文通过SiRNA干扰技术敲除脂肪细胞中 CD36，然后比较了CD36正常表达和静默表达后，脂肪细胞生成FFA和PGE2的差异。结果发 现，CD36敲除后抑制了脂解诱导的巨噬细胞迁移，降低了PGE2含量，但对FFA释放并无影 响，进一步证实PGE2可能介导了巨噬细胞迁移。CD36敲除后，cPLA2α的转录表达明显下 调，同时磷酸化水平明显降低，提示CD36敲除后cPLA2α活力受到抑制，同时COX2基因表 达显著下调，以上结果表明CD36通过影响cPLA2α转录和磷酸化调节减少了花生四烯酸产 生，并通过进一步影响COX2表达参与调节PGE2的合成，提示CD36可能通过影响脂肪细胞