水产贝类中副溶血弧菌创伤弧菌基因检测的分析.pdfVIP

水产贝类中副溶血弧菌与创伤弧菌的基闻检测与分析 水产贝类中副溶血弧菌与创伤弧菌的 基因检测与分析 摘 要 致病微生物的快速检测与分离技术是致病微生物研究的热点之一。PCR能 够快速检测食品中存在的致病微生物，是一种有效的快速检测手段。探针原位 杂交技术可以有效的检测和快速分离食品中存在的致病微生物。本论文采用 PCR和探针原位杂交技术分离贝类中的副溶血弧菌和创伤弧菌。 应用tlh探针和tdh探针检测分离存在于贝类样品中的副溶血弧菌，在近一 个月的实验中有两次tlh探针杂交结果呈阳性，共分离出了六株tlh阳性菌株。 但tdh探针的检测结果都为阴性，用PCR对分离出来的六株uh阳性菌株进行 检验，结果都为tlh阳性。用PCR及nh探针和tdh探针分析从青岛市疾病控制 中心得到的六株副溶血弧菌，发现这六株菌都为uh阳性菌株，其中五株为tdh 阳性菌株，且都不是新03：K6菌株，PCR结果与探针杂交结果相一致。应用 PCR技术检测贝类(主要是蛤蜊)样品中的创伤弧菌，在近四个月的检测中在 蛤蜊样品中检到了三次创伤弧菌，用碱磷酶标记的VVAP探针分离创伤弧菌， 分离出了两株创伤弧菌。 运用RAPD技术对六株tdh阳性菌株进行基因分型，结果表明虽然这六株 菌都为tdh阳性菌株，但在遗传物质上存在差异，其中菌株VPS与其它五株从 青岛分离出来的副溶血弧菌在基因上有较大的差异，引物oligol7获得的多态性 条带最多，为9条。 由于国内无法将碱性磷酸酶标记到寡核苷酸探针上，采用生物素标记的探 针来代替碱性磷酸酶标记的探针，经过多次的实验，得到了与碱磷酶标记的探 针相近的杂交效果。 水产贝类中副溶血弧菌与刨伤弧菌的基因枪测与分析 对从青岛分离出来的tdh阳性菌株VP3的tdh基因进行序列分析，发现VP3 与WPl的tdh基因序列完全相同，与VPS的同源性为99．5％。对分离到的两株 创伤弧菌的vvhA基因进行克隆，经BLASTn分析表明这两株创伤弧菌的vvhA 基因与菌株L一180的核苷酸同源性最高，VVl与菌株L一180的核苷酸同源性 为99．57％，VV2与菌株L一180的核苷酸同源性99．72％。 关键词：PCR；探针；RAPD；副溶血弧菌；创伤弧菌 2 水产贝类中副溶血弧菌与创伤弧菌的基因检测与分析 and ofVibrio Detection Gene Analysis and Vibrio vulnificus parahaemolyticus in Seashells aquatic Abstract for of detectionandisolation have microorganisms Techniquesquick pathogenic an on chain effective beenconcentratedrecent