粟酒裂殖酵母RNA组学：snmRNA大规模筛选与结构功能及研究.pdf

李思光 中山大学博Ij学位论义 摘 要 催化或调控分子的方式参与细胞中的各种生命活动。大规模筛选和签定 snmRNA、研究其结构和功能，对揭示细胞中的各种生命现象具有重要作用。 本文采用实验RNA组学方法构建了粟酒裂殖酵母核小分子RNA的cDNA 文库，通过文库筛选和序列测定，共获得了43种新的snmRNA，其中20种 H／ACA H／ACA snmRNA具有boxsnoRNA的序列和结构元件，为新的box H／ACA 杂交显示，20种box snoRNA均能产生明显的杂交信号，表明他们是能 够在细胞中稳定表达的snoRNA分子；23种无保守序列元件和结构元件的 snmRNA分子中有21种能产生明显的杂交信号，2种来自蛋白质基因反义链的 分子无明显杂交信号，可能是由于它们的表达水平太低造成。 H／ACA 将粟酒裂殖酵母20种box snoRNA与目前已经报道的酿酒酵母box H／ACA 中有功能同源分子，1种有部分功能同源分子。根据snoRNA的命名原则，这8 H／ACA 粟酒裂殖酵母box snoRNA的二级结构存在明显的多样性。虽然大多数 H／ACA snoRNA二级结构特征，即存在发夹．铰链一发夹一 snoRNA具有典型的box H／ACA snoRNA，它们由3 和snR!Ol等snoRNA的二级结构不同于典型的box H／ACA 个发卡环组成。20种粟酒裂殖酵付box rRNA互补的反义 rRNA互补的反义序列，4种snoRNA具有两个与18S或25S rRNA互补的反义序列，它们在18S和25S 序列，1种snoRNA具有三个与25S H／ACA 符合box snoRNA指导假尿嘧啶修饰的基本条件。根据snoRNA结构与功 能的关系，推测它们指导这19个配对区上特定位点的假尿嘧啶修饰。另外7种 snoRNA家族的新 snoRNA不具备指导rRNA或snRNA修饰的功能，为orphan 成员。 采用BLAST程序对粟酒裂殖酵母基因组进行搜索，发现本文鉴定的20种 boxH／ACAsnoRNA均由单拷贝基因编码，它们分别位于粟酒裂殖酵母染色体 nt。除snR90 【、II和III上蛋白质基因的间隔区，其问隔区的大小为600至3000 粟酒裂精酵母RNA组学：snmRNA大姚模筛选Zt：tt-结构与功能研究 H／ACA 外，所有box snoRNA基因的5’端卜游和3’端下游均无其它snoRNA基 困。在这些snoRNA基因5’端上游埯发璁了典型戆TATA box元{牛，表明它饲 都怒独立转录的基因。snR90基因位于一个非编码RNA基闲的外照子中，该非 编礤RNA繁因的连食子中逐存在一个box C／D类snoRNA(snR80)基因。 23种无保守序捌元件和结构元件的smnRNA均为单拷贝基因编码，它们在 基因组上的定位{}常复杂，獒中9张smnRNA位于蛋白质基因的间隔区，4粒位 互幸}，2种与剪接点互补，1种与5’UTR互{I。 采用同源重组技