补体补体检测.pptVIP

3. 免疫粘附（C3b） 4.炎症介质作用（C3a、C4a、C5a） C3a，C4a，C5a，具有过敏毒素作用，可使表面具有相应受体的肥大细胞和嗜碱性粒细胞等脱颗粒，释放组胺等血管活性物质，引起血管扩张、通透性增强、平滑肌收缩和支器官痉挛等的作用； C5a对中性粒细胞具有趋化作用，吸引具有相应受体的中性粒细胞和单核吞噬细胞向补体激活的炎症区域游走和聚集，增强炎症反应。 第十七章 补体检测及应用 检测内容 1、血清总补体活性测定 2、单个补体成分测定 3、补体结合试验 1、血清补体总活性测定 （一）试验原理： 补体最主要的活性是溶细胞作用 特异性抗体+红细胞→激活补体→溶血 在特定的反应体系中，溶血的程度与补体活性呈正相关，相关性呈一特殊的S形曲线 溶血程度与补体含量的关系 在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化对溶血程度的影响不大，即溶血对补体量的依赖不敏感。但在30％～70%溶血时，补体含量仅出现较小的变动，溶血程度也会发生较大的改变，即曲线此阶段对补体量的变化非常敏感 因此，血清补体总活性测定取50%溶血作为判断终点，比100%溶血更为敏感，故该方法称为补体50%溶血实验（50% complement hemolysis），即CH50。 （二）CH50的测定方法 SRBC和溶血素作为补体经典活化途径的激活剂和指示物 当SRBC和溶血素浓度恒定时，溶血程度与补体总活性相关 将新鲜待检血清稀释后，取不同量加入反应体系，测定各管溶血程度，以50%溶血时的最小补体量为一个CH50单位，由此可以计算出待测血清中总补体活性，以U/ml表示。 取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂 试管号 BBS 1:20稀释血清 2％SRBC 2U溶血素 补体溶血活性 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1.40 1.35 1.30 1.25 1.20 1.15 1.10 1.05 1.00 1.50 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.00 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 置 37℃ 水浴 30min 200 133 100 80 66.6 57.1 50 44.4 40 - CH50(U/ml)=1/血清用量×稀释倍数 方法评价与临床意义 方法简便、快速，但敏感性较低，影响因素较多 检测补体经典途径的溶血活性，反映C1-C9的综合水平 参考范围50-100U/ml 如果测定值过低或完全无活性，应考虑补体缺陷 可通过单个补体成分的检测，明确是否因某一成分缺乏所致。 2、单个补体成分测定 常用的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等 测定方法： --免疫溶血法 （检测单个补体成分的活性） --免疫化学法（检测单个补体成分的含量） 自动化免疫散射比浊法（临床） 3、补体结合试验 将免疫溶血作为指示系统，用以检测另一反应系统中抗原或抗体的传统方法。 5种成分，分属3个系统 --反应系统：已知抗原（或抗体）与待测抗体（或抗原） --补体系统 --指示系统：SRBC与溶血素，试验时常将其预先结合，成为致敏绵羊红细胞 反应分两步进行 第一步:反应系统与补体的作用 第二步:指示系统利用剩余补体的反应 结果判断：不溶血为补体结合试验阳性，而溶血为 试验阴性 方法评价 优 点 灵敏度高、所测定的抗体水平可达0.05μg/ml 出现交叉反应的机率较小，特异性强 可检测的抗原或抗体范围广泛 无需特殊设备、结果容易观察、试验条件要求不高 现 状 参与的成分多，影响因素复杂，操作繁琐，难以标准化 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对新型免疫方法的建立有着启迪和指导作用 1919年诺贝尔奖 Jules Bordet (1870-1961) 补体及补体结合反应 1899年发现补体系统 补体系统是一种生物级联反应体系，是由生物大分子组成的连续而又分级的应激反应系统，其本质是功能上相互关联的蛋白质分子之间的连续酶促反应。 补体不仅是机体固有免疫防