《农杆菌介导邓肯葡萄柚遗传转化的影响因素 Study on Influencing Factors for Transformation of Citrus paradisi Mediated by Agrobacterium》.pdfVIP

贵州农业科学2013，41 9 ：15～19 Guizhou Sciences Agricultural 农杆菌介导邓肯葡萄柚遗传转化的影响因素 陆荣生1，韩美丽H，林睿2，马跃峰1，杨玉霞1，覃建林 1．广西农业科学院植保护研究所，广西作物病虫害生物学重点实验室，广西南宁530007； 2．广西医科大学，广西南宁530001 [摘 要]为建立柑桔抗寒基因转化体系并获得转基因植株，以邓肯葡萄柚上胚轴为外植体，研究了农 杆菌介导的遗传转化中影响转化效率的因素。结果表明：抑菌剂抗菌素中，替门汀杀茵效果较好，且对外植 0．28 体出芽无明显抑制作用；在附加0．75mg／LTDZ的预培养基上预培养3d、共培养基添加DTT mg／L 及5％海藻糖、选择初期5～7d的暗培养等措施均有利于卡那抗性芽发生率的提高。PCR扩增检测结果显 示，AFT基因已转化至邓肯葡萄柚。 [关键词]葡萄柚；抗性芽；农杆菌；转化 [中图分类号]$666．9；Q322[文献标识码]A on FactorsforTransformationofCitrus StudyInfluencing paradisi Medi atedA bygrobacterium LU Meilil，LINRui2，MA Yuxial，QINGJianlinl Rongshen91，HAN Yuefen91，YANG 1．InstitutePlant DiseasesandInsect of Protection，GuangxiKey Biologyfor Pests，Guangxi Laboratoryof Crop Medical AcademyofAgriculturalScience，Nanning，Guangxi530007；2．Guangxi 530021，China factorswhichhadinflueneesAFT transfertocitrus， Abstract：Byexploring during gene transformationof from wereestablishedand systemepicotylsC．paradisiseedlingepicotyls transgenic wereobtainedinthis transformationwasassessedin toseveral plant paper．The frequency response different antibiotics factors，includingtypeconcentration，pre—culture thancefotaxime media，darkincubationinonsetsof theantibiotics，timentinwasbetter selection．Among sodiumCeftriaxonesodiumfor ofadventitious contr01of differentiation budsgrowth 3 of in medium0．75 TDZ，CO—cultureinmedium0． daysexplantspre—culturepre—culture plus mg／L adding 28 DTTand5％trehalase，andindarknessfor5-7 afterCO—culturewere toKan mg／L growing days help anti—bud wereobtainedPCR developing．Transgenicplants by assay． words：Citrus Key paradisi；resistantbud；agrobacterium；transformation 葡萄柚 Citrus Macf 是世界四大柑用功能的目的基因转入的报道日益增多，如 paradisi 桔之一，在欧美地区大量种植，我国引种开始较晚， Shawkat 目前尚未形成规模种植。葡萄柚营养丰富，主要用 计可以提高柠檬的抗盐能力；JanaynnaBM等[31将 于鲜食及果汁加工，同时其果皮中有高含量的精油， HRPN基因采用农杆菌介导法转入哈姆林甜橙，转 这种精油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌具有 化植株对柑橘溃疡病抗性提高70％；还有一些衰退 较强的抑制作用，是一种开发潜力较大的生物抗菌 病外壳蛋白相关基因、马玲薯病原相关蛋白基因、抗 素资源[1]。但葡萄柚是多年生木本植物，童期长，传 菌肽基因等目的基因转入柑桔的报道[4 ]。目前，国 统杂交育种方法费时低效，且品种内抗性资源有限。 内没有葡萄柚转化的相