《5-脂氧合酶基因打靶小鼠及细胞核定位研究》.pdfVIP

第1期 中国科学基会 19 ·学科进展· 5一脂氧合酶基因打靶小鼠及细胞核定位研究 陈新生‘ 王 寅 殷明 (第二军医大学药学院，上海200433) [摘要]简要介绍了5．脂氧合酶基因打靶小鼠模型的性质，在各种疾病模型中的表型，以及5一脂 氧台酶细胞核定位研究的新进展。 [关键词]5-脂氧合酶．基因打靶，细胞核定位 花生四烯酸在体内主要通过环氧台酶和脂氧合 中的220一277个，位于蛋白组氨酸铁离子配体编码 酶途径代谢。脂氧合酶存在于白细胞、巨噬细胞和 区域的上游H．5J。 肥大细胞内，依据其对花生四烯酸氧化位置的不同 以胚胎干细胞打靶技术产生5．脂氧合酶基因缺 分为5．、12一和15一脂氧合酶。花生四烯酸与位于细 胞核膜的5一脂氧合酶激动蛋白结合后，被递呈给5一 129Sv系。以SoulhernBlot确证子代的5一脂氧合酶 脂氧合酶，经氧化代谢产生羟基二十碳五烯酸和白 基因被破坏，以WestemBlot及酶活性评价方法表明 三烯类物质。白二三烯是强有力的炎症介质，对哮喘、 骨髓衍生肥大细胞、腹腔及肺泡巨噬细胞中5．脂氧 类风湿性关节炎、过敏性鼻炎、银屑病及癌症等常见 合酶蛋白和酶功能丧失_5l。从而首次得到无白三烯 多发病的发生发展起很大作用。 合成功能的哺乳动物。 基于基因同源重组原理产生5一脂氧台酶基因打 5-LO‘／一小鼠在子宫内生长发育正常，外表无 靶小鼠模型，对阐明5．脂氧合酶在细胞内的功能、定 明显异常，能正常繁殖”J。从正常及5．LO。一小鼠 位、基因调控，酶对白三烯类生物合成调控的机制， 分离到的巨噬细胞、骨髓肥大细胞激活后均能表达 新型治疗药物研制具有重要意义。本文就有关5一脂 5一脂氧合酶、分泌白三烯。5-LO“一细胞绝大多数方 氧合酶基因打靶小鼠及酶细胞核定位的研究新进展 面表现正常，经钙离子载体A23187作用后，骨髓衍 作一介绍。 生肥大细胞释放的颗粒成分，前列腺素合成水平与 野生型小鼠细胞基本相同。经酵母多糖刺激．5一 l 5一脂氧合酶基因打靶小鼠研究 LO“一腹腔巨噬细胞合成与野生型细胞相等数量的 人的5一脂氧合酶基因位于10号染色体富含 前列腺素，但吞噬功能部分丧失。肥大细胞及巨噬 kb，有14个外显子。其启动子细胞的细胞特异性功能还有待进一步研究，以阐明 CpG的片段．长约80 区域有CCGCCC的串联重复序列“1J。迄今，对5一 5．脂氧合酶通路的更多功能。 脂氧台酶基因调控机制了解甚少。从小鼠克隆到与 对5-LO一‘小鼠在各种实验模型的表型已进行 人5．脂氧合酶基因的3个外显子具同源性的片 详尽研究。如卵清蛋白诱导5-LO。一小鼠产生哮喘 段【4J。其外显子／内含子接头的位置与人基因相似， 模型，其支气管肺泡灌流液嗜酸细胞的积累减少，卡 但内含子的尺寸明显不同”15。 巴胆碱激发的气道阻力减轻，总IgE及卵清蛋白特 以小鼠5．脂氧合酶基因含外显子4—6的片段 异性IgG量降低．免疫反应性降低．6二。 构建目标载体，在外显子6处插入新霉素抗性盒。 PAF诱导5-LO。一小鼠产生休克模型，其死亡 这部分基因编码含673个氨基酸的5一脂氧合酶蛋白率降低，初始血压下降，2—3小时恢复，同野生型一 ·1999午国家杰出青年科学基金获得者 本文于2000年9月27日收到 万方数据 20 中国科学基金