《5′-氮杂-2#39;-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响》.pdfVIP

解放军医药杂志2014年6月 第26卷 第6期 Med PharmJ Chin PLA,Vol.26,No.6,Jun.2014 ·33 · 肿瘤基础与临床 ·论著 · 5′-氮杂 -2-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株 HT-29和 LoVo中 MGMT基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响 许春伟,葛　 畅,王鲁平,方　 园,张玉萍 　 　 [摘要]　 目的　 探讨甲基化酶抑制剂5′-氮杂-2-脱氧胞苷(5′-Aza-CdR)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细 胞株HT-29和LoVo 中MGMT基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。 方法　 用0.5、1.0、1.5 μmol/ L浓度的5′- Aza-CdR处理CRC细胞株HT-29和LoVo。 应用MethyLight方法、实时荧光定量PCR方法及蛋白印迹试验(Western- blot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中MGMT基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达情况。 结果　 MethyLight 检测HT-29和LoVo细胞中MGMT蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转。 实时荧光定量PCR检测5′-Aza-CdR浓 度为0.5、1.0、1.5 μmol/ L组HT-29细胞株和LoVo细胞株MGMT基因mRNA表达水平均较对照组上调,Western blot 检测5′-Aza-CdR浓度为0.5、1.0、1.5 μmol/ L组 MGMT 蛋白表达水平均较对照组上调,且均具有药物剂量依赖性 (P0．05,P0．01)。 结论　 CRC细胞株HT-29和LoVo 中MGMT基因启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚 至失活的主要原因。 5′-Aza-CdR能够逆转CRC细胞株HT-29 和LoVo 中MGMT基因的甲基化状态,并能恢复mRNA 及蛋白重新表达。 　 　 [关键词]　 结直肠肿瘤;DNA 甲基化;5′-氮杂-2-脱氧胞苷;MGMT基因 [中国图书资料分类号]　 R735.34　 　 [文献标志码]　 A　 　 [文章编号]　 2095-140X(2014)06-0033-06 [DOI]　 10.3969/ j.issn.2095-140X.2014.06.009 Effect of5-Aza-2-deoxycytidine on Methylation Status ofMGMT Gene,mRNA Expression and Protein Expres- sion in Cell Lines of HT-29 and LoVo Colorectal Cancer XU Chun-wei,GEChang,WANGLu-ping,FANGYuan,ZHANGYu-ping (DepartmentofPathology,GeneralHospital of Beijing Military Area Command,Beijing 100700,China) [Abstract]　 Objective　 Toinvestigatetheeffectsof5-Aza-2-deoxycytidine (5′-Aza-CdR)ofamethylationinhib- itor on methylation status of MGMTgene,the mRNA expression and protein expression in cell lines of HT-29 and LoVo colorectal cancer (CRC). Methods　 Cell lines of HT-29 and LoVo CRCwere treated with0.5,1.0 and 1.5 μmol/ L concentrationsof5′-Aza-CdR respectively. Values of methylation status of MGMTgene,the mRNA expression and pro- tein expression in cell lines of HT-29 and LoVo colorectal cancer were determined by methods of MethyLight,SYBR Green PCR and Western blot respect