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1
万方数据
目 录
中文摘要……………………………………………………………3
Abstract……………………………………………………………5
英文缩略词表………………………………………………………8
前 言……………………………………………………………9
材料与方法…………………………………………………………11
结 果……………………………………………………………17
讨 论……………………………………………………………26
结 论……………………………………………………………29
参考文献……………………………………………………………31
致 谢……………………………………………………………33
综 述……………………………………………………………34
2
万方数据
基因修饰的BMSCs 复合胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石仿生
支架体内构建组织工程骨软骨的研究
中文摘要
【目的】
探讨TGF- β1和BMP-2基因修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）复合新型仿生
支架材料胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石修复关节软骨和软骨下骨损伤的可
行性，为组织工程化骨软骨的临床应用提供实验依据。
【方法】
联合应用密度梯度离心法及贴壁培养法分离、培养、纯化猪BMSCs，应用TGF-
β1和BMP-2重组慢病毒转染的BMSCs，荧光显微镜观察转染率；将转染后细胞分
层复合到胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石支架 （Col-CS/nHAC-PLA）材料上，
扫描电子显微镜（SEM）检测支架的孔隙率、孔径和BMSCs在支架上的粘附生长情
况，制作猪股骨髁骨软骨损伤的动物模型，并应用复合TGF- β1和BMP-2基因修饰
的BMSCs的支架进行修复。分别在12W、24W取材，观察修复组织的大体情况、苏
木精-伊红染色、碱性磷酸酶染色、阿尔新蓝过碘酸雪夫染色、Ⅱ型胶原免疫组
化染色情况，评价软骨和软骨下骨损伤的修复情况。
【结果】
1、联合应用密度梯度离心法和贴壁培养法可以成功分离、培养、纯化猪
BMSCs，TGF- β1和BMP-2重组慢病毒可成功转染的BMSCs，荧光显微镜下观察到荧
光蛋白表达，间接反映TGF- β1和BMP-2蛋白的表达。
2、Col-CS/nHAC-PLA经SEM检测，其孔隙率都达到80%左右，CS孔径约为30-100
μm之间，HA孔径约为50-120 μm之间，符合BMSCs生长所需微环境，SEM还观察到
BMSCs在支架上粘附生长的情况。
3、成功制作猪膝关节骨软骨损伤动物模型，并应用组织工程骨软骨进行修
复。12W时，大体及组织学观察示细胞复合组新生软骨较单纯材料组厚且表面较
平整，新生软骨和软骨下骨连续性好，成骨细胞胞浆中棕色的碱性磷酸酶颗粒较
多，新生软骨基质连续性好，染成棕色的Ⅱ型胶原明显。24W时，大体及组织学
观察示细胞复合组较单纯材料组新生软骨完整且较透明，新生软骨和软骨下骨连
3
万方数据
续性好且排列规则，成骨细胞及胞浆中棕色的碱性磷酸酶颗粒多，新生软骨基质
连续性好且排列规则，染成棕色的Ⅱ型胶原明显。
4、将修复的组织作为一个整体，进行ODriscoll，Keeley and Salter组织
形态学评分。统计提示实验
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