《miR-34b甲基化在白血病细胞增殖中的影响》.pdfVIP

·840· ．论著 miR一34b甲基化在白血病细胞 增殖中的影响 曹岚王娜 潘健 古桂雄胡绍燕赵文理 柴忆欢 【摘要】 目的研究miR一34b在白血病细胞株的表达及其启动子区CpG岛甲基化状态，探讨 miR-34b甲基化对白血病细胞增殖的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT．PCR)检测 同期20例非血液病患儿骨髓细胞作为对照并与其比较。采用甲基化特异PCR检测miR．34b在8种 白血病细胞株miR-34b的甲基化程度，选择同期23例非血液病患儿骨髓细胞作为对照并与其比较。 地西他滨(5-aza．2一dC)处理HL-60及K562细胞，检测其甲基化状态及miR一34b的相对表达量。采用 脂质体转染hsa—miR一34b到K562细胞、通过流式细胞仪检测转染效率、CCK一8法检测各时期hsa—miR一 34b转染组细胞增殖情况并与未转染组、阴性对照转染组比较。结果miR一34b在非血液病患儿骨髓 细胞、白血病细胞株组的相对表达量分别为5．22±1．15、0．03-I-0．03，白血病细胞株组与非血液病患 儿骨髓细胞相比，差异有统计学意义(t=4．538，P0．叭)。8种白血病细胞株均出现甲基化现象，其 甲基化阳性率为100％；23例非血液病患儿骨髓细胞，无一例出现甲基化现象。5-aza-2一dC处理白血 病细胞株HL-60及K562后，其甲基化条带均明显减弱，miR一34b的相对表达量均明显升高，分别为处 理前的49．5倍和18．8倍。脂质体转染hsa．miR一34b到K562细胞其转染效率为61％，CCK-8法检测 hsa．miR．34b转染组各时期均出现细胞增殖抑制作用，与阴性对照转染组相比，差异有统计学意义 h：t=18．748，P (48h：t=9．303，P0．01；72h：t=65．617，P0．01；96h：t=36．878，P0．0l；120 0．01)。抑制率分别为12．2％、45．7％、32．5％、22．9％，其中72h抑制作用最明显。结论启动子区 CpG岛甲基化使miR一34b在白血病细胞株表达降低，导致细胞增殖抑制作用减弱，可能是白血病发生 或发展的原因之一。 【关键词】 白血病；细胞增殖；DNA甲基化 EffectofDNA onthe ofleukemiacelIs miR．34bCao methylationproliferation regulatedby Lan+， Na，PanJian，GH Shaoyan，Zhao耽凡如，ChaiYihuarL+DepartmentofHematology Wang Guixiong，Hu and 215003。China Oncology．Children’SHospitalofSoochowUniversity．Suzhou author：Chai Corresponding Yihuan(Email：cyh一1949@aliyun．con) To the leveland island statusofmiR一34b 【Abstract】Objectivestudyexpression CpG methylation linesandtoresearchtheeffectofDNA onthe ofleukemiacells inleukemiacell methylationproliferation miR-34b．Methodreal—timefluorescence chainreaction regulatedby Taqman quantitativepolymerase carriedouttodetecttherelative ofmiR一34bincontrol marrowcells (qRT．PCR)was