《n-3多不饱和脂肪酸对哮喘小鼠白三烯B4及5脂氧合酶基因表达的影响》.pdfVIP

塞旦匡堂盘查2堂生筮!!鲞蔓§塑 塞旦蜃堂銎查2她生蔓垫鲞蔓!塑 及4B5脂氧合酶基因表达的影响烯三白鼠小喘哮对酸肪脂和饱不多3．n 王 强 摘要 聪黄娟 晓周春运罗 目的：探讨n．3多不饱和脂肪酸(n．3PUFA)对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(bmnchoalveol盯lavage 注： 纛鏊闹刨囊薹雾窭l趋蒌霸j≯；ij耋蠢三．J羹董鏊篓璧薹茎薹蘩霾囊蓁E萋雾萋至：慈霎篓，藿；妥彳萎善鋈嚣羹鹜 图 1各时间点各组7rcP 希』淄涫曼；氧l H8．O)高火10min修复 抗原。室温静置20min，滴加正常山羊血清37℃封闭 30min ，甩干血清加一抗EDl(1：150稀释)，4℃过 h。用DAPI 夜。TRn℃标记兔抗小鼠IgG室温孵育l (1mg／L)复染细胞核，室温下孵育5min。除血清封闭 后直接加一抗外．其余各步问用0．Olmol／L磷酸盐缓 冲液PBS (pH=7．4)洗5min×3次。50％缓冲甘油封片。 共聚焦荧光显微镜下观察并摄片。以呈现绿色强荧 光信号定为阳性。阴性对照用等量的PBS代替一抗。 注： 其余步骤同前。 圈2 各时间各组点24h尿蛋白定量 每只动物计算25个高倍视野(×400)肾皮质问质 中EDl+ 间质 细胞数目．将25个视野细胞数求和、取均值。 扩张、伴有少量单核细胞浸润；第14天出现较明 得到该动物肾间质浸润巨噬细胞数。 显肾小管损害和肾问质纤维化：第2l天大量肾小管 1．5 RT．PCR用Trizol 上皮细胞坏死萎缩，弥漫的单核、淋巴细胞浸润、大量 RNA提取试剂盒(Invi呐gen公 成纤 维细胞增生及胶原纤维化形成。纤维化程度严 司)提取总RNA，RT．PCR按照Invitrogen公司逆转录 试剂盒说明 重。 各治疗组肾小管损害和肾间质纤维化程度显著减 书进行。转化生长因子一Bl(TGF．B1)PCR 反应条件：95℃预变性5IIIin，94℃变性30s，54℃退火 轻(P 3072℃延伸45 质损 8， s，32个循环，最后72℃保温lOmin。 害分值显著低于L50组(P0．05)。见表l。 GAPDHPCR反应条件：95℃预变性5min。94℃变性2．3免疫荧光染色假手术组肾问质仅偶见个别巨 30 噬细 s．51℃退火30s，72℃延伸45s，30个循环。产物经 胞。UUO模型建立后，随着疾病进展，巨噬细胞浸 1．2％琼脂糖电泳和凝胶成像系统分析，计算与内参照 GAPDH 吸光度A比值。 1．6统计学分析用SPSS10．O统计软件分析。计量 资料以露± s表示，均数的多组间比较采用方差分析。 2结果 2． 1各组大鼠血压及生化改变图l显示：各时间点 UU 0组血压较其余各组显著升高(PO．05)，两治疗 组与假手术组之间差异无显著性(P0．05)。术后第 21天．L500组较L50组有更好的降压效果。图2显 示： 各时间点UUO组24h尿蛋白定量较其余各组显 著增多(PO．05)，术后第7天两治疗组与假手术组之 间差异无显著性(P0．05)。术后第14天及2l天， L5 00组较L50组尿蛋白排泄显著减少(P0．05)。 2．2各治