《PcDNA3.1-Tum-5基因真核表达载体的构建》.pdfVIP

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2015-12-09 发布于河南
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《PcDNA3.1-Tum-5基因真核表达载体的构建》.pdf

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壁擅基础与临床2010年12月第23卷第6期 ·46l· PcDNA3．1-Trim一5基因真核表达载体的构建张军，兰斌，孙启强 (福建医科大学附属第一医院胃肠外科，福建福州350005) eDNA获得切，克隆并测序酶切产物。结果巢式PCR扩增出的产物与目的基因大小相同；重组质粒经双酶切电泳分析。与预期结果一致；对连接点两端进行测序，结果显示接头两端序列连接正确，插入序列与载体读码框架相匹配。结论本方法可以成功构建人Turn-5 基因表达载体，为进一步研究Turn-5基因功能提供了理论依据。关键词：肿瘤抑素；质粒；Turn-5基因；巢式PCR 文献标识码：A 中圈分类号：Q782；R735．2 文章编号：1673—5412(2010)06—0461—03 TheConstructionofPcDNA3．1一Tum-5 Vectors EukaryoticExpression ZhangJun，LanBin，Sun Qiqiang Gastrointestinal Medical (Departmentof Surgery，theAffiliatedHospitalofFujian University，Fuzhou350005。China) ToconstructPcDNA3．1一Tum-5 vector Tum一5 Turn-5 were Abstract：0bjective eukaryoticexpression genes．Methods carrying genes constructedhuman celllineHEK293cDNA nestedPCRandDNA from embryonic extractionkit．PeDNA3．1was kidney byusing plasmid andextracted Turn一5 andPcDNA3．1 receivedEcoRVandXholdouble amplified simultaneously．Thegenes plasmid digestions respectively， bandswereconnectedT4DNA DH5a ligase，transformed cells，andobtained recoverycorresponding by competent positive DNAreceivedandXholdouble wereclonedand Production nested Kpnl digestions，digestionproducts sequenced．Resultsamplifiedby P