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成纤维细胞生长因子21的代谢活动需要βKlotho 成纤维细胞生长因子21（FGF21）是一种由肝脏合成的内分泌因子，具有促进脂肪细胞摄取葡萄糖的功能。我们发现，FGF21的活动取决于βKlotho—一种单次跨膜蛋白，这种蛋白的表达在前成脂肪细胞分化到脂肪细胞的过程中逐渐减少。βKlotho蛋白与FGF受体1c和4相互作用，从而增强FGF受体结合FGF21的能力，进而激活MAPK级联。以siRNA敲除脂肪细胞的βKlotho基因，可以使FGF21诱导的葡萄糖摄取量减少。重要的是，给小鼠FGF21可以诱导白色脂肪组织内的MAP激酶途径磷酸化，而失去βKlotho表达的组织内则不会发生这种变化。因此，βKlotho作为一种辅助因子，在FGF21的功能中有着关键性的作用。 关键词 Klotho | 葡萄糖 | 脂肪细胞 | 葡萄糖转运体1 成纤维细胞生长因子21（FGF21）的识别，源于它与其他FGF具有同系环状DNA序列。种系发生学以及结构学的分析，将FGF21归类为FGF19亚科，这一亚科由FGF15（人类FGF19的小鼠直向同源物），FGF19，FGF21和FGF23组成。FGF19亚科内的生长因子与其他15种FGF的区别之处在于，前者以内分泌的方式实现生物作用。FGF23主要由骨组织分泌并作用于肾脏从而抑制磷酸盐的重吸收和维生素D的生物合成。FGF15由肠粘膜上皮表达并参与肝脏中胆汁酸合成的负反馈调节。FGF21最主要的表达部位在肝脏，且已经在一项针对具有治疗糖尿病潜力的新因子的研究中显现出了作为脂肪细胞摄取葡萄糖的代谢性调节剂的作用。事实上，无论是给肥胖的小鼠还是已经患有糖尿病的小鼠使用重组FGF21，都能降低其血糖水平。此外，过度表达FGF21的转基因小鼠表现为低血糖，对胰岛素敏感以及能够抵抗由饮食诱导的肥胖。 FGF21可以活化FGF受体（FGFRs）并向下游分子传递信号，包括脂肪细胞中的FGFR底物2α（FRS2α）以及44/42MAP激酶（ERK1/2）。然而，旨于论证FGF受体与FGF21之间的直接相互作用关系的试验都以失败告终。另外，包括3T3-L1前成脂肪细胞在内的许多种非脂肪细胞的细胞类型，尽管它们表达多种亚型的FGF受体，但对FGF21却没有反应。此外，过度表达FGF受体的BaF3细胞需要高于药理学剂量的FGF21（200-800nM）才能产生可检测到的促有丝分裂作用。这些观察结论说明，在脂肪细胞中，FGF21可能需要辅助因子来完成FGF信号传递的激活。 我们同其他人一起鉴定了Klotho，一种单次跨膜蛋白质，在FGF23活化的FGF23信号传递过程中是一个起关键作用的辅助因子。 Klotho最初是作为一种基因突变在显现出与人类过早老化综合征相似表型的Klotho小鼠中得以被识别。通过对缺乏Klotho蛋白的小鼠与敲除FGF23基因的小鼠的观察，发现了较多的表型重叠，这说明，Klotho和FGF23可能是通过共同的信号转到通路实现作用。确实，在许多种人工培养的细胞中，Klotho蛋白与FGF受体相互锚定并在FGF23结合FGF受体及激活FGF信号传出中发挥必要的作用。在本次试验中，我们的目的是展示作为Klotho蛋白家族一员的βKlotho，在FGF21的信号传出中起着辅助因子的作用。 结果和讨论 FGF21需要Klotho来激活FGF的信号传递。FGF21和FGF23都不能在亲代的293细胞中传递信号这一事实已经由其对磷酸化的FRS2和ERK1/2缺乏感应这一现象所证实（图1）。我们之前曾报道过异位的过度表达的Klotho可以引起293细胞对FGF23的反应。然而，这些过度表达Klotho的细胞并不对FGF21的刺激产生反应。相比之下，表达相关βKlotho蛋白的293细胞获得了对FGF21刺激的反应能力（图1）。我们发现，Klotho蛋白通过与FGF23及FGF受体形成三元复合体来促进FGF23的信号传递。因此，我们检测了是否在FGF21的信号传递中，Klotho也是通过形成三元复合体而发挥类似的作用。 图1 图1：FGF21的信号传递需要βKlotho。分别将βKlotho和Klotho的模拟载体（假载体）或表达载体转染入293细胞，随后给予其刺激，刺激物为赋形剂（对照）或300ng/ml重组人FGF21或300ng/mlFGF23，作用时间为10分钟。细胞溶解产物经过处理分别与磷酸化的FRS2α抗体，磷酸化的ERK1/2抗体，完全ERK1/2抗体，βKlotho抗体或βKlotho抗体进行免疫印迹试验。 βKlotho与多种FGF受体结合。哺乳动物的FGF受体由四种不同的基因编码（FGFR1-FGFR4）。典型的FGF受体的胞外域由三种免疫球蛋白样的区域组成（D1-D3）。