生物样品分析方法的基本要求.ppt

第四节 生物样品分析方法的基本要求 在测定生物样品中药物及其代谢物时，一般要在测定前进行样品的前处理，即进行分离、纯化、浓集。 一、常用品种的种类、采集和贮藏 生物样品包括各种体液和组织，常用是血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液。 （一）血样  血浆（plasma)和血清（serum)是最常用的生物样品。 测定血中药物浓度通常是指测定血浆或血清中的药物浓度，而不是指含有血细胞的全血中的药物浓度。 一般认为，当药物在体内达到稳定状态时，血浆中药物浓度与药物在作用点的浓度紧密相关，即血浆中的药物浓度反映了药物在体内（靶器官）的状况，因而血浆浓度可作为作用部位药物浓度的可靠指标。 1.取样： 供测定的血样应能代表整个血药浓度，因而应待药物在血液中分布均匀后取样。 动物实验时，可直接从动脉或心脏取血。 对于病人，通常采取静脉血，有时根据血药浓度和分析方法灵敏度。也可用毛细管采血。 2.制备： 血浆的制备 将采取的血液置含有抗凝剂（如：肝素、草酸盐等）的试管中，混合后，离心，分离血细胞，上清液即为血浆。 肝素是一种含硫酸盐的粘多糖，常用其钠盐、钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白。一般lml的全血需加0.1—0.2mg的肝素，加入血样后立即轻轻旋摇，但勿太猛烈，以免导致血细胞破裂。 血清的制备 血清是由血液中纤维蛋白原等影响下，引起血液凝结而析出的澄清黄色液体，经离心其量约为全血量的30％一50％。在室温高时，血凝过程进行得很快，宜在血凝后半小时内分离血清。当室温低时，血凝过程较慢，可将血液置37℃温度下加速血清析出。 血浆及血清中的药物浓度测定值通常是相同的。  全血也应加入抗凝剂混匀，防止凝血。对大多数药物来说血浆浓度与红细胞中的浓度成正比，所以测定全血也不能提供更多的数据。由于全血的净化较血浆和血清麻烦，特别是溶血后，血色素等可能会给测定带来影响。 3.特点： 血样的采取量受到限制、间隔时间，采集方法：一般取1ml—2m1。用注射器、毛细管或微量采血管采取。血样的采血时间间隔应随测定目的的不同而异。 采取血样后，应及时分离血浆或血清，并立即进行分析。如不能立即测定时，应完全密塞后保存，短期冷藏（4℃），长期冷冻（-20℃）保存。 （二）唾液 唾液的采集应尽可能在刺激少的安静状态下进行。一般在漱口后15min收集。 采集后立即测量其除去泡沫部分的体积。放置后分为泡沫部分、透明部分及灰乳白色沉淀部分三层。分层后离心分离，取上清液作为药物浓度测定的样品。 可集中、单一部位采集。 唾液中含有粘蛋白，为阻止粘蛋白的生成，应将唾液在4℃以下保存，解冻后搅匀后再用，否则会产生误差。 优点：可以不受时间和地点的限制，很容易地反复采集，采集时无痛苦无危险；有些唾液中药物浓度可以反映血浆中游离型药物浓度。 缺点： 唾液是各腺体分泌的的混合液体，其组成发生经时变动；因此，唾液中的药物浓度与血浆中的游离型药物浓度相比就容易变动； 唾液中药物浓度与血浆中药物浓度的比值(S/P)只有少数药物是恒定值； 有些与蛋白结合率较高的药物，药物在唾液中的浓度比血浆浓度低得多，需要高灵敏度的分析方法才能检测； 对有些患者（如癫痛二昏迷）不能采集唾液样品。 （三）尿液 尿药测定主要用于药物剂量回收研究、尿清除率、生物利用度的研究。 体内药物清除主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物（conjugates）等形式排出。 尿液主要成分是水、含氮化合物（其中大部分是尿素）及盐类。 尿液中药物浓度较高，收集量可以很大，也方便，但尿液浓度通常变化较大，应测定一定时间内排入尿中药物的总量，这就需要测定在规定时间内的尿液体积及尿药浓度，时间尿以外的尿不可能推断全尿中药物的排泄浓度和药物总量。 测定尿中药物的总量时，将一定时间内（如8h;12h或24h等）排泄的尿液全部储存起来，并记录其体积，取其一部分测定药物浓度，然后乘以尿量求得排泄总量。采集的尿液时，需用量筒准确地测量储尿量，并做好记录。 缺点：尿液中药物浓度与血药浓度相关性差；受试者的肾功能正常与否直接影响药物排泄，因而肾功能不良者不宜采集尿样；婴儿的排尿时间难于掌握；尿液不易采集完全并不易保存。 采集的尿样应立即侧定。若收集24h的尿液不能立即测定时，应加入防腐剂置冰箱中保存。常用防腐剂有：甲苯等，短时冷藏；长时冷冻。 二 生物样