九吸光光度法.ppt

第九章吸光光度法 教学要求 教学要求 教学重点及难点 教学重点及难点 课后作业 讨论 : 当为纯单色光时， A总= κλ1bc 当单色光不纯时， λ1=λ2 κλ1= κλ2 A总∝ c 线性破坏 结论： 单色光纯度越差，线性越差 λ1=λ2 κλ1= κλ2 §9-1. 吸光光度法的基本原理 ??2 ??1 ?A1 ?A2 例??1=??2 但 ?A1 》 ?A2 ? 0 减少单色光不纯引起偏差方法 ——— 在?max处测量 ?在?max 处 单色光不纯 但 ?ε2=0 测量误差较小 §9-1. 吸光光度法的基本原理 2）溶液本身引起的偏差 （1）若溶液浓度＞0.01mol·L-1时，粒子间的相互作用 §9-1. 吸光光度法的基本原理 朗伯—比耳定律是建立在所有的吸光质点之间不发生相互作用的前提下的，当溶液浓度较高（c 10 -2 mol ·L-1）时，吸光质点间分子或离子的平均距离减小，就会发生相互作用而改变吸光质点的电荷分布，改变它们对光的吸收能力，即改变吸光质点的摩尔吸光系数，浓度越大，这种影响就越显著。 朗伯—比耳定律只适用于稀溶液(c10-2 mol ·L-1) 。 2）溶液本身引起的偏差 （2）溶液以胶体、乳浊、悬浮状态存在时，有反射、散射作用 §9-1. 吸光光度法的基本原理 例 : (橙色) (黄色) λmax=450nm A总 包括离解、缔合、生成新物质、形成异构体 使吸光物质改变 吸光度值变化 产生偏离 pH ， 平衡 移, （3）溶液内部的化学变化 §9-1. 吸光光度法的基本原理 λmax=375nm 目视比色法 c1 c2 c3 c4 c5 [Fe(SCN)n]3-n 配制一组标准浓度系列 C x §9-2. 光度计及其基本部件 分光光度法 : 仪器—分光光度计 基本组成： 光源 单色器 样品室 显示器 检测器 §9-2. 光度计及其基本部件 ＊ 光源 (钨灯、氢灯、氘灯） 能发射紫外光区或可见光谱区的连续光谱； 足够的辐射强度、稳定性较好、使用寿命较长 基本要求 : 常用的光源 : 可见光区: 钨灯 (辐射波长为320nm~2500nm) 紫外区: 氢灯、氘灯(辐射波长为185nm~400nm) §9-2. 光度计及其基本部件 ＊ 单色器 作用 : 将光源发射的复合光分解成单色光的光学系统 （棱镜或光栅） 组成 : 棱镜或光栅等色散元件及狭缝和透镜等 §9-2. 光度计及其基本部件 棱镜分光 入射狭缝：光源的光由此进入单色器 准光装置：透镜或反射镜使入射光成为平行光束 聚焦装置：将分光后的单色光聚焦至出口狭缝 （透镜或凹面镜） 色散元件：将复合光分解成单色光 §9-2. 光度计及其基本部件 光栅分光原理 利用不同波长入射光产生干涉条纹，干涉条纹的衍射角不同而将复合光分成单色光。 §9-2. 光度计及其基本部件 ＊ 样品室 用于放置各种类型的吸收池(比色皿)和相应的池架附件 比色皿厚度: 0.5, 1, 2, 3, …cm 比色皿: 石英池和玻璃池 §9-2. 光度计及其基本部件 比色皿配对：对于光的吸收应一致 玻璃比色皿会吸收可见光 ＊ 检测器 作用:通过光电效应，使透过吸收池的光信号变成可测的电信号的装置。 （光电管或光电倍增管） 要求：对测定波长范围内的光有快速、灵敏的响应，产生的光电流应与照射于检测器上的光强度成正比。 (1)光电管 (2)光电二极管阵列：可以在极短时间内，获得全光光谱。 §9-2. 光度计及其基本部件 (1)光电管 涂光敏材料 光照 光敏材料 产生电子 产生电流 电压 光强度大 电流大 §9-2. 光度计及其基本部件 ＊显示器 由检流计、数字显示、微机组 成的自动控制和结果处理系统 §9-2. 光度计及其基本部件 §9-3、显色反应和显色条件的选择 1.显色剂作用 2. 显色反应的选择 3. 影响显色反应的因素 4. 显色剂的分类 1.作用 无色或浅色 试样 有色物 +显色剂 比色 显色反应 配合反应 氧化还原反应 缩合反应 重氮化—偶氮化反应 §9-3、显色反应和显色条件的选择 2.显色反应的选择 灵敏度高 ε=104－105 (2) 选择性好 (3) 有色物组成恒定，化学性质稳定 (4) 对比度大：显色剂在测定波长处无明显吸收 对比度=λmax有色物 -λmax显色剂＞60nm §9-3、显色反应和显色条件的选择 3.影响显色反应的因素 (1) 显色剂用量 根据吸光度A与显色剂浓度cR的关系来确定 cR选择——引起A变化最小处的cR（即曲线平坦处）