粒细胞集落刺激因子对动脉系统中慢性阻塞性病变作用的实验的研究.pdf

复旦大学博士论文 中文摘要 中文摘要 粒细胞集落刺激因子(G．CSF)是广泛应用于放疗和化疗患者动员干祖细胞 支持造血恢复的细胞因子。近来研究表明，G．CSF可动员骨髓干细胞进入循环， 促使心肌再生和血管新生而改善心脏功能。作为非侵入性治疗，因此有可能更广 泛应用于心肌梗死及慢性缺血性心脏病，具备广阔的临床前景。但目前相关研究 多局限于它对心脏的作用及机制，对于血管，尤其是与缺血性心脏病紧密相关的 慢性动脉阻塞性病变，鲜有报道。另外，G．CSF动员后，直接效应是导致白细胞 增多，可能引起高凝状态。这是否会诱发动脉阻塞病变的恶化，目前亦尚未明确。 总之，G-CSF对动脉系统及慢性阻塞血管局部的影响，国内外学术界尚无定论。 新近许多研究证实，骨髓、外周血、脐血中存在着内皮祖细胞(endothelial progenitorcells，EPCs)，在损伤信号的刺激下能被招募到血管损伤局部，分化为 成熟内皮细胞，参与血管新生和修复。G．CSF作为外源性干细胞动员剂，能刺激 骨髓中EPCs进入外周血，加速损伤血管的再内皮化。结合上述不良反应，由此 我们推断，其必然对局部血管，包括慢性动脉阻塞性病变及动脉系统本身也存在 修复作用甚至副作用。 慢性动脉阻塞性病变作为一种血管损伤，是一系列常见的影响人类健康的心 血管疾病，改变的不仅仅是血管的形态和结构，更重要的是其功能的变化。基于 此，本研究从形态和功能两方面系统地阐述这个问题。 实验分以下四部分： 第一部分兔颈动脉慢性阻塞模型的构建及影像学评价的研究 目的：制备新型兔颈总动脉慢性阻塞动物模型，为下一步研究粒细胞集落刺 激因子对动脉慢性阻塞性病变的作用提供实验基础。方法：健康实验用新西兰大 白兔18只，随机分为假手术组、4周组和8周组，每组6只；利用右颈总动脉 植入动脉缩窄环制备慢性动脉阻塞模型；应用颈动脉超声以及血管磁共振的影像 学手段随访评价模型的构建效果；术后4周(4周组)或8周(8周组)处死动 PCR 物，分离慢性阻塞缩窄环近端及远端行病理学检查并用扫描电镜、Real．time 检测eNOS和ET-lmRNA评估阻塞区域局部内皮结构功能的变化。结果：18只 实验兔中17头成活，并成功建立颈总动脉慢性阻塞模型兔11只；植入动脉缩窄 环后，4周即见颈总动脉逐步阻塞，颈总动脉超声随访显示血管内径从术前 内径更是显著下降至(O．48士0．06)cm，狭窄达到(95士3)％，与对照组及4周组相比， 变化绝对值具有统计学意义(P如．05)，同时血流速度及阻力指数亦有显著变化； 兔颈总动脉磁共振显示造模前清晰可见，双侧基本对称，血管内径为 复旦大学博士论文 中文摘要 8周后几乎完全阻塞，仅残留细线痕迹，与假手术组相比，差别有统计学意义 (P0．05)；相应血管段病理检查发现造模后内膜继续增厚，细胞外基质增加， 以致管腔重度狭窄甚至闭塞；电镜扫描证实慢性阻塞后内皮细胞凋亡，基质表面 颗粒状物增大；Real．timePCR可见慢性阻塞动脉远端血管ET-I基因的上调和 eNOS基因的下调及对侧动脉的代偿性变化。结论：应用动脉收缩环4周后即可 以成功制作慢性动脉阻塞性病变动物模型，8周更为显著，并出现相应血管段内 皮形态及功能变化。 关键词：模型，动物，颈总动脉，新西兰兔，颈动脉超声，磁共振 【中图分类号】R363 第二部分粒细胞集落刺激因子(G．CSl0对动脉慢性阻塞病变局部血管段的影响 目的：利用慢性动脉阻塞性病动物模型，随访观察G．CSF应用过程中血管局 部功能和基质结构的变化，探索G．CSF治疗心血管疾病时对局部慢性阻塞病变动 脉的影响，再评价其安全性，从而为临床实践提供新的理论依据。方法：健康实 验用新西兰大白兔36只，先随机分为高脂喂养及普通喂养2组，再各自细分为3 亚组分别为假手术组、慢性动脉阻塞性模型组和慢性动脉阻塞性模型加G．CSF干 预组，每组6只；采用高脂喂养制备动脉粥样硬化模型；G．CSF干预为1 5I．tg／kg／d