毕赤酵母表达牛促卵泡激素研究.pdf

‘q l 堡主堂堡笙查 i|lUll I I IIIIIrIII I IIIIl 14 Y20836 摘要 p．胡萝卜素和番茄红素都是具有较高营养价值和药用价值的类胡萝卜素，国 内用三孢布拉氏霉(Blakeslea mspora)发酵生产这两种类胡萝卜素已形成产业 效应、高产菌株的筛选及稳定性、优化了高产菌株发酵生产p．胡萝卜素和番茄红 素的工艺，探讨了5L、100L及1000L发酵罐放大规律并实现了产业化生产。 矿·cm之处，其中用双潘宁源处理B．tr／spOY口(一)更有助于促进菌体合成类胡萝卜 量相同的情况下，不同注量的矿注入B．trispOr吠_)的正突变率随着注量的增加 60x1014 体内所增加的类胡萝卜素也具有类似CAT和CuZn．SOD的抗氧化功能，它使菌 体清除自由基的能力有所增强；离子注入生物体所诱导的总抗氧化能力的变化则 很可能是导致生物体存活率一注量曲线呈现“马鞍型”特征变化的原因之一。 进行，也为其他霉菌的诱变选育提供参考。 用离子束对B．trispOY口(-)进行诱变选育，结合测定菌体抗氧化酶活性的变 化，筛选出BH3．701等三株类胡萝卜素高产菌株。连续五代遗传稳定性实验结 果表明，高产菌株遗传稳定性较好，其中BH3．701生产B．胡萝卜素的平均产量 比出发菌株提高78．7％，表现出很强的发酵积累p．胡萝卜素的能力。 摘要 正交实验优化得BH3．701菌株种子培养基的组成为玉米粉409．L～，黄豆粉 发酵的组成为玉米粉309．L．1，黄豆粉309．L-1，玉米油309．L-1，葡萄糖30g．L一， 磷酸二氢钾29．L一，维生素B12mg．L-1，硫酸镁0．59．L～，Tween801．09．L～。 优化的p．胡萝b素发酵工艺条件为：初始pH值7．0，摇床转速240r．min1， 种比例(体积比)1：10，在此条件下摇瓶发酵p．胡萝b素的产量可达到3．59．L-1。。 实验室优化的添加环化酶抑制剂发酵番茄红素的工艺为：摇瓶发酵——发 酵到48h时，加入浓度为1．09．L以的2．氨基．5甲基吡啶，在此条件下番茄红素的 产量可达到1．59．L～。发酵罐中发酵一一当发酵液中p．胡萝卜素的含量达到 O．19．L-1左右时加入1．09．L．1的2．氨基．5甲基吡啶，可以有效抑制番茄红素环化酶 的活性，促进番茄红素的合成。其他条件不变，在发酵进行到24h时，以50mg．L1 的添加量加入三孢酸，可以使摇瓶中番茄红素的产量达到1．659．U1。在发酵番茄 红素的过程中添加三孢酸尚处于摇瓶研究阶段，本文采用添加环化酶抑制剂(2． 氨基．5甲基吡啶)的工艺发酵番茄红素。 考察了5L发酵罐中分批发酵过程规律以及操作条件(如温度、搅拌转速和通 和番茄红素的过程。实验结果表明，高的溶解氧对于B．t,．imota生长及类胡萝b 素合成有着至关重要的意义，以发酵过程中体系相对溶氧值作为放大类胡萝卜素 发酵过程的依据简便、易行、可靠，对类胡萝卜素的产业化生产具有实用价值。 适合1000L罐发酵p．胡萝b素的操作条件为：工作体积700L，培养基初始 oc，在罐压为0．08MPa左右，搅拌转速50 pH值7．0，温度28±O．5 线调节发酵过程的相对溶氧值，在此条件下发酵72h左右，p．胡萝卜素的产量为 3．29．L．‘；将发酵温度控制改为25±0．5C，其他条件不变，当发酵至p．胡萝卜素 番茄红素的产量为1．39．L-1。在实验所用1000L发酵罐条件下发酵体系相对溶氧 较低，不能满足茵体合成类胡萝卜素的需要，导致菌体次级代谢过程提前终止， 所以1000L罐中发酵类胡萝b素产量比摇瓶降低10％。 该项目已经成功转让给江苏江山制药有限公司(目前主要生产番茄红素)，诱 Ⅱ