菜蛾盘绒茧蜂调控寄主小菜蛾的生理机制的研究.pdf

四、菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞对小菜蛾生长和发育的影响 采用显微注射畸形细胞的方法，结合假寄生和过寄生手段，研究了菜蛾盘绒茧蜂畸形细 胞对寄主小菜蛾生长和发育的影响。假寄生后，寄主末龄幼虫期显著延长，不能化蛹：假寄 生初期，寄主体重降低，过寄生后，这种抑制程度加剧。但到假寄生后期，当未寄生寄主正 常化蛹后，假寄生寄主继续取食、发育，成为超重幼虫，最大体重可达10．52mg；注射畸形 细胞后，引起寄主发育受阻，表现在生长缓慢，幼虫期延长，部分形成幼虫一蛹的中间型。 而正常寄生后，寄主的发育与未寄生寄主相比，始终处于抑制状态。假寄生与正常寄生后寄 主的生长和发育呈现明显的差异，说明这种差异部分是由畸形细胞引起的。 五、菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞的分泌功能 成熟的菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞具有很强的蛋白合成能力。体外培养证实，它不仅能分泌 产生蛋白，还能分泌非蛋白物质，从而为它的营养功能提供了更充足的证据。畸形细胞能在 体外存活30多天，当它与幼蜂共培养时，能促进幼蜂存活和发育。与脂肪体的共培养，能 造成脂肪体组织变得松散．同时脂肪体的存在对畸形细胞的发育有利。经金属蛋白酶电泳， 证实三种寄生状态(正常寄生、假寄主及未寄生)的寄主血淋巴都含有大量的蛋白酶，但寄 生寄主有特异蛋白酶条带出现。将畸形细胞的分泌产物及不同寄生状态下寄主血淋巴蛋白与 blot印迹分析，结果显示，它们均有阳性反应，证明畸 胶厥酶Ⅳ型单克隆抗体进行Western 形细胞具有分泌胶原酶的能力。 六、菜蛾盘绒茧蜂一小菜蛾寄生体系其它寄生因子特性 在菜蛾盘绒茧蜂～小菜蛾寄生体系中，除涉及畸形细胞、PDV和毒液这些主要寄生因子 外，该蜂产卵注入的卵巢蛋白、蜂卵表面的类病毒样纤丝、蜂卵初孵化时贴附在幼蜂体上的 羊膜，以及幼蜂来源蛋白等因子在寄生的不同时期存在于寄主体内。我们对上述因子的特性 进行了研究，并对它们的生理功能进行了分析。通过问接ELISA法和免疫双扩散法证明， 该体系中畸形细胞、PDV和毒液存在着免疫相关性，这为它们在协调寄主和寄生蜂相互关 系中的协同作用提供了有利证据。 七、菜蛾盘绒茧蜂主要寄生因子对小菜蛾的免疫抑制 PDV和毒液抑制寄主酚氧化酶(PO)活性的能力强，能防止寄主血淋巴的黑化：同时， 抑制寄主血细胞的免疫包囊能力具有长效性。但正常寄生后的寄主PO活性下降更明显，暗 示畸形细胞在其中也起了一定的作用。在假寄生后7d内．蜂卵没有被包囊的比例为100％， 在显著延长的长达14d的整个幼虫期蜂卵绝大多数没有被包囊，只有个别出现黑化或局部黑 化现象，比例为8．3％1也有个别蜂卵被少量血细胞粘附；PDV、毒液和畸形细胞并不能完 全抑制寄主浆血胞的延展能力：加有畸形细胞匀浆液、毒液和萼液的寄主血淋巴与未寄生寄 主血淋巴黑化程度一致，说明三者中没有抑制PO活性的抑制因子；畸形细胞在不加PDV 和毒液的血淋巴中没有被包囊，说明畸形细胞具有一定的抑制血细胞包囊的能力，但在未寄 出现大量的囊泡状突起，这为该蜂不能在非适合性寄主中完成发育提供了更有利的证据。 八、菜蛾盘绒茧蜂三种主要寄生因子对寄主小菜蛾的发育调控 在不同的寄生状态和不同的发育时期，寄主小菜蛾脂肪体结构和蛋白质的质和量都发生 相应的变化。显微和超微形态结构显示，假寄生后，PDV和毒液对脂肪体结构的完整性没 有影响，但细胞内脂质体小而密集，线粒体、内质网丰富，并有糖原积累：正常寄生后则不 同．因畸形细胞和幼蜂的作用，脂肪体结构被破坏，特别是细胞器受损严重，脂质体也变得 不规则．当幼蜂完成在寄主体内的发育时，这种破坏程度加剧：同批未寄生寄主已发育到4 龄末期，脂肪体细胞己开始向蛹期过渡，部分已成为游离的细胞，脂滴大，细胞器、糖原丰 富；到预蛹期，蛋白积累明显，出现大量的晶体状颗粒蛋白，表现蛹期细胞形态。双向电泳 图谱显示：不同处理和处于不同发育时期的小菜蛾体内脂肪体蛋白，也是蛹期种类最多。寄 生抑制了脂肪体蛋白的积累，使寄主不能化蛹。说明脂肪体不仅是寄主化蛹的重要能量来源， 对于幼蜂的发育也是如此。无论是假寄生还是正常寄生，均显著降低寄主血淋巴蛋白浓度， 而尤以正常寄生后为最低：血淋巴蛋白双向电泳图谱进一步显示．正常寄生后蛋白种类出现 与假寄生和未寄生不同的特异蛋白，推测很大程度上是由畸形细胞的分泌产物造成的。另外， 还证实菜蛾盘绒茧蜂PDV和毒液是引起寄主小菜蛾寄生性去势的主要原因，假寄生后，显 著降低精巢的发育：同时，它们对中肠的发育也产生影响。 九、三种内寄生蜂寄生因子对寄主小菜蛾的调控