合子胚培养副本.ppt

第10章 合子胚培养 1 合子胚培养的概念 1.1 植物胚胎培养的概念 植物胚胎培养是指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植株的技术。 1.2 合子胚培养的概念 合子胚培养是指在无菌条件下分离和培养有性胚，以期获得可育植株的一种技术。 1904年，Hannig最早在无菌条件下进行了离体胚培养实验（辣根菜和胡萝卜的成熟胚）。 依靠合子胚培养技术，现在已经能够挽救早熟败育的杂种胚。 2 胚培养的类型 2.1 成熟胚培养 培养基和培养条件：培养基只需含无机盐和糖即可；提供合适的生长条件及打破休眠。 培养技术：成熟胚培养技术也要求不严 操作：受精后的果实或种子（带种皮） 表面消毒 剥离种胚 培养 完整植株。 发育途径：主要是直接形成幼苗 2.2 幼胚（未成熟胚）培养 幼胚指的是尚未成熟即发育早期的胚。 特点： 培养困难，对培养基的要求复杂 对培养技术和培养条件的要求较高 幼胚培养发育途径： （1）继续正常的胚胎发育过程，维持胚性生长，最终形成具有萌发能力的成熟胚。 进行幼胚培养时，关键是维持胚性生长（此途径为需要途径）。为了保证离体幼胚能沿着胚胎发生的途径发育，其对营养的需求较成熟胚复杂。 （2）不能维持胚性生长，迅速萌发为幼苗。 幼胚未经完成正常的胚胎发育过程而形成幼苗的现象称为“早熟萌发”(precocious germination，不需要)。 （3）形成愈伤组织。 若形成愈伤组织，愈伤组织可再分化形成植株。 3 合子胚培养的技术措施 3.1 材料的选择与灭菌（p157） （1）幼胚培养 选材：因植物类型及实验目的的不同而不同 表面消毒：对受精后子房进行表面消毒 （2）成熟胚培养：取成熟的果实或种子进行表面消毒，再分离胚进行和培养。 3.2 胚的分离及培养 3.2.1 胚的分离 成熟胚的剥离：较容易 幼胚的剥离（p157～158）： 表面消毒 切开子房壁 取出胚珠 剥离珠被 取出完整幼胚 培养 3.2.2 胚的培养 成熟胚的培养： 只需提供合适的生长条件及打破休眠，即可在比较简单的培养基上萌发生长，形成幼苗。故培养基只需含无机盐和糖即可。 另外，成熟胚培养技术也要求不严。 未成熟胚的培养：要求的技术和条件较高。 胚胎发育过程可分为两个时期：异养期和自养期。胚由异养转入自养是其发育的关键时期。在这两个时期之内，培养中的胚对外源营养的要求随胚龄的增加而逐渐趋向简单（p153，表9.1） 。 在人工培养基上幼胚培养难成功，利用胚乳看护培养（为什么？），可显著提高幼胚的成活率。可用同种胚乳，也可用异种胚乳（p159）。 4 影响胚培养的因素 4.1 培养基 4.1.1 无机盐 用于胚培养的无机盐配方很多，对其中每种成分的作用并无精确的评价。 成熟胚培养中，主要采用一些较简单的培养基，如Tukey、Randolph、White等。 幼胚培养的培养基主要有MS、B5、Nitsch、Rijven、White、Rangaswang、Norstog等。 根据Monnier(1976)的研究，在一定的培养基上，未成熟胚的生长和存活之间并不存在相关性（p161，图9.4），并设计了新的培养基（ p154～155，表9.3 ）。 另据Umbeck和Norstog(1979)报道，培养基中的NH4＋对于大麦未成熟胚的正常生长和分化是必需的。 4.1.2 碳水化合物和培养基的渗透压 种类：蔗糖最好 浓度：因胚的发育时期而有所不同。成熟胚在含2％蔗糖的培养基中就能很好生长；幼胚则要求较高水平的糖浓度（一般为8％～12％ ），如果浓度过低，会引起幼胚过早萌发。 在长期的培养过程中，随着培养时间的增加，必须把胚转移到蔗糖水平逐步降低的培养基中。 蔗糖不仅是作为一种能源，而且是为了保持适当的渗透压，后者对于未成熟胚的培养来说尤为重要。 另有观点认为，胚在离体条件下的生长和分化在很大程度上并不依赖于渗透压的大小，而主要取决于某些生长调节物质的存在与否。 4.1.3 氨基酸和维生素 在胚培养中加入氨基酸，无论是单一的还是复合的，都能刺激胚的生长。加单一氨基酸时，以谷氨酰胺最有效。 水解酪蛋白(CH)是一种氨基酸复合物，一直被广泛用于胚培养。胚对水解酪蛋白的敏感性因物种而异。 常用于胚培养的维生素类有硫胺素、吡哆醇、烟酸、泛酸钙等。维生素对发育初期的幼胚培养是必需的，但对已萌发生长的胚，可能对其形态发生有抑制作用。 4.1.4 植物生长调节剂 除了在某些植物中为了打破休眠以外，没有证据表明离体的成熟或未成熟胚的正常发育需要外源生长调节物质。实际上，生长素对于胚的生长通常表现抑制作用。 如果为了由胚和胚段诱导愈伤组织，