酶工程第三章动植物细胞培养产酶.pptVIP

全世界用其制备天然芳香化合物的价值超过15亿＄/年； 美国用其生产药物超过30亿＄/年； 我国使用的中草药及其制备大部分来自植物； 主要生产色素、药物、香精、酶等次级代谢物。 二、植物细胞培养的特点 例如：紫草宁的生产，发酵细胞中的紫草宁比紫草根中高10倍。 （2）缩短周期 发酵周期10～30天，种植周期几个月～几年。 （3）易于管理 减低劳动强度；不受地理环境和气候条件等影响。 （4）提高产品质量 主要产物浓度高，易于分离纯化，减少环境中各种有害物质污染和侵蚀。 （5）其它 设计植物细胞生物反应器和控制工艺条件时应注意一些问题。 1、外植体的选择与处理 外植体是指从植株取出，经过预处理后，用于植物组织和细胞培养的植物组织（包括根、茎、叶、芽、花、果实、种子等）的片段或小块； 选择无病虫害、生长旺盛的植株； 切成小块，消毒，漂洗 机械法 具体做法： 将叶片轻轻研碎、过滤离心、收集净化 从未分化的疏松易碎的愈伤组织，通过摇床振荡获得分散的单细胞或小细胞团 优点： 细胞不受酶伤害；有利于进行细胞的生理和生化研究。 酶解法 酶对细胞壁有一定的软化作用，所以采用酶法时，必须加入甘露醇等渗透压保护剂。 优点 可获得较多的叶肉游离细胞（但对禾本科植物叶片效果不好）。 3、植物细胞培养基的配制 （三）温度的控制　室温（25℃） （四）pH值的控制 微酸性（pH5～6） （五）溶解氧的调节控制 代谢慢，耗氧少，对剪切力敏感，搅拌不宜强烈。 （六）光照的控制 （七）前体的添加　提高次级代谢物的产量。 （八）刺激剂(electior)的应用 　　　强化次级代谢产物的生物合成。常用微生物细胞壁碎片和胞外酶。 四、植物细胞培养产酶的工艺过程 SOD是生物体内清除超氧化物阴离子自由基(O 2—)的重要金属酶类。它和过氧化氢酶、过氧化物酶一起构成了生物体内重要的酶促反应防御体系，从而维护生物体内细胞正常的生理代谢和生化反应。衰老自由基学说认为衰老源于机体正常代谢过程中产生过量的自由基对机体损害的结果。超氧化物歧化酶(SOD)作为能催化超氧阴离子发生歧化反应的自由基清除剂，具有延缓衰老的作用。 动物细胞可产生较高价值的物质,特别是激素、疫苗，单克隆抗体和酶等动物功能蛋白。 一、动物细胞的特性 （1）无细胞壁,脆弱; （2）体积比微生物细胞大几千倍,稍小于植物细胞; （3）具有群体效应、锚地依赖性、接触抑制性、功能全能性； （4）营养要求复杂。 三、动物细胞培养的方式 来自血液、淋巴组织的细胞、肿瘤细胞、杂交瘤细胞等非锚定依赖性细胞采用。 类似于微生物细胞的深层发酵，但工艺条件有较大差别。 细胞悬浮培养法的优点 可连续收集部分细胞进行移植继代培养，传代时无需消化分散，免遭酶类、EDTA及机械损害。 细胞收率高，并可连续测定细胞浓度，还有可能实现大规模直接克隆培养。 注意事项 培养过程中，为确保细胞呈单颗粒均匀悬浮状态，需采用搅拌或气升式反应器，以较低搅拌速度及一定速度通入含5％CO2的无菌空气，保持细胞悬浮态并维持培养液溶解氧。 此外不同细胞悬浮条件亦异，为使细胞不致凝集、成团或沉淀，在配制培养基的基础盐溶液中不加钙和镁离子。间歇或连续更换部分培养液，可维持pH值，若使用HEPES缓冲盐溶液时尚可不必连续通入含5％CO2空气。 （二）贴壁培养 大多数动物细胞，采用: （1）滚瓶培养系统: 结构简单,重现性好; （2）微载体系统: 将动物细胞吸附于微载体表面，在培养液中进行悬浮培养，使细胞在微载体表面长成单层的培养方法称为微载体培养法。 由葡聚糖凝胶制成微球,动物细胞依附其上单层生长繁殖,悬浮于培养液中; 特点:比表面积大,单位体积培养液细胞产率高;具有悬浮培养的优点。 制备微载体的材料主要有： 葡聚糖（DEAE—Sephadex A50及A25 ） 塑料 明胶 玻璃 纤维素 四、动物细胞培养的工艺条件及其控制 种质细胞：体细胞、杂交瘤细胞； 工艺过程： （一）动物细胞培养基组成成分 1、氨基酸：各种必需氨基酸，谷氨酰胺等， 作为碳源和能源利用； 2、维生素：血清中，B族和维C； 3、无机盐：调节渗透压； 4、葡萄糖：作为碳源和能源； 5、激素：胰岛素、生长激素、氢化可的松； 6、生长因子：如表皮生长因子、神经生长 因子、成纤维细胞生长因子。 （二）动物细胞培养基的配制 首先配制各类母液，使用前混合过滤除菌，使用时稀释至所需浓度； 各种动物培养基已商品化。 （四）pH值的控制 一般控制在pH7.0～7.6; 培养过程中需要对pH值进行监测和调节； 采用CO2和NaHCO3溶液调节:需注意溶解氧的控制；流加酸碱液； 加入缓冲系统； 监测指示剂为酚红。 五、