核酸的制备.pptVIP

基因工程 第一章 核酸的制备 DNA 的提取与纯化是基因工程操作的重要技术。由于基因工程操作大部分要靠生物酶来进行，因此对DNA的质量要求十分高，不纯的DNA往往是整个工程的限速因素。DNA的提取和纯化主要技术为碱抽提法、煮沸法、氯化铯超离心法、柱层析法等。因方法的简繁、费用的高低、对设备的要求及产物的质量的严格程度不同而各具优缺点。 第一节 天然DNA的制备 天然DNA包括染色体DNA、质粒DNA、病毒DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA。 基因工程中最常用到的DNA是染色体DNA和质粒DNA。 一、DNA的组成和结构 DNA是脱氧核糖核酸的简称，是由4种脱氧核糖核苷酸按照一定顺序聚合而成的大分子。 核苷酸简写为nt,由五碳糖(核糖或脱氧核糖)、磷酸和碱基组成。 在脱氧核糖核苷酸链中，各个脱氧核糖核苷酸的脱氧核糖和磷酸基团的结构和位置相同，只有碱基不同。因此，可用碱基(bp)序列表示核苷酸(nt)序列。 大部分DNA都是以双链存在。真核生物的染色体DNA为双链线状，真核生物的细胞器DNA、原核生物的染色体DNA、质粒DNA多为双链环状。 二、天然DNA的提取 提取DNA，一般要裂解细胞，去除杂质(蛋白质、多糖等)，分离出DNA,再进一步纯化。