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《家畜育种学》 专业词汇 西南大学动物科技学院 2014年11月13日 《家畜育种学》专业词汇 DNA 分子标记 DNA molecular marker DNA 水平的遗传标记 , 简称 DNA 标记。 DNA 分子标记是 20 世纪 70 年代才发现的 , 所有 DNA 分子标记都具有以下特点 : ①标记数量大 , 对某一动植物个体而言 , 其数目可达 108~1010 个。②大多数呈中性突变 , 因而不受自然选择或人工选择影响而保持高度的多态性。③遗传极稳定 , 不受生理期和环境等因素影响 , 呈等显性或完全显性遗传。目前 , 已发现的 DNA 分子标记有 : ①限制性片段长度多态性 (RFLP), 这是由于 DNA 限制性酶能识别 DNA 链特异性的序列 , 催化核苷酸内切性裂解 , 从而产生特定长度的片段。通过特殊的方法可以检测出来。②可变数目串联重复 (VNTRs) 多态性 , 包括小卫星 DNA 多态性及微卫星 DNA 多态性 , 前者要用特定的小卫星探针才能检测出来。后者重复数量多 , 重复单位简短 ( 一般由 1~4 个核苷酸构成 ), 且较易通过聚合酶链反应 (PCR) 将其从基因组 DNA 中特异性地扩增出来 , 大大简化了 DNA 多态性分析的实验操作程序而被广泛的应用。③随机扩增多态性 DNA(RAPD), 这是采用随机引物 PCR 反应从基因组中随机扩增出的多态性 DNA 片段 , 具有操作简便的优点 , 但重复性、稳定性较差。 ④ DNA 单链构象多态性（ SSCP ）和 DNA 双链构象多态性（ DSCP ），以及单核苷酸多态性（ SNP ）等。 DNA 分子标记已广泛应用于群体遗传关系分析，分子育种及跟踪选育进展，基因定位等方面。 PCR polymerase chain reaction ? 即 DNA 聚合酶链式反应技术。它能从 DNA 分子中选择性地复制一段特异性序列 , 使该 DNA 片段得到特异性扩增 , 所以是一种基因体外扩增技术。该技术的操作原理是把提取纯化的基因组 DNA, 用限制性内切酶切成片段。双链 DNA 分子经变性成单链 , 作为 DNA 聚合酶链式反应的模板。然后合成两种与待扩增 DNA 片段相邻的核苷酸序列互补的寡聚核苷酸引物 , 过量地加入到变性 DNA 模板中 , 加入 4 种脱氧核苷三磷酸中的任何一种作为底物 , 并加人 DNA Taq 聚合酶后 , 合成反应开始 , 引物延长 , 形成变性一退火一合成的特异 DNA 扩增反应循环 , 致使特异 DNA 片段 ( 基因 ) 得到扩增。 DNA PCR 扩增已成为分子生物学中的基本操作而得到广泛应用。 RFLP restriction fragment length polymorphism 限制性片段长度多态性的英文缩写。此项技术是 1980 年美国学者 Botstein 首先发现 , 现仍被广泛使用。基本原理是用限制性内切酶酶切不同个体的基因组 DNA, 产生大小不等的 DNA 片段 , 通过电泳和 southern 印迹转移到支持膜上 , 利用同位素或非同位素标记的某一片段 DNA 作为探针 , 使酶切片段与探针杂交 , 从而显示与探针有同源顺序的酶切片段在长度上的差异。这种差异反映了 DNA 分子水平上的变异 , 它可能是限制性内切酶识别位点的改变 , 也可能是部分片段的缺失、插入、易位、倒位 , 显示出丰富的多态性。 RFLP 标记的优点是 : ①呈共显性遗传 , 可以区分纯合体和杂合体基因型。②不存在表型效应 , 不受个体发育阶段和环境条件影响。③非等位的 RFLP 标记之间无基因互作 , 结果稳定可靠 , 重复性好。④ RFLP 普遍存在于各种生物的基因组 DNA 中。不足之处是多态位点信息含量低 , 操作过程复杂 , 需要的 DNA 量也大。 RAPD random amplified polymorphic DNA 随机扩增多态性 DNA 。是 Williams 等人于 1990 年首创的一种 DNA 技术。它以 PCR 为基础 , 利用人工合成的约 10bp 的随机序列寡核背酸作引物 , 以生物的基因组 DNA 为模板 , 进行 PCR 扩增 , 产生不连续的 DNA 产物 , 通过琼脂糖凝胶电泳来检测 DNA 序列的多态性。 RAPD 反应的循环次数可多达 40~50 次 , 每次循环中 , 双链 DNA 在 95 ℃的高温下变性 , 解开双螺旋成为单链模板 , 然后在低温 (36 o C) 条件下与随机引物结合 , 在 DNA 多聚酶的作用下 , 按碱基互补原则沿 5 至 3 的方向把核苷酸链延长 , 完成 DNA 复制。如此反复数十次 , 可以使单一的 DNA 序列扩增 10