燃煤型氟斑牙动物模型的建立和过量氟对模型大鼠成釉细胞Bcl2及其Bax蛋白表达的影响.pdfVIP

遵义医学院颂Ii,2义 燃煤型氟斑牙动物模型的建立和过量氟对模型人鼠成釉细胞Bcl．2及Bax蛋白表达的影响 燃煤型氟斑牙动物模型的建立和过量氟对模型大鼠成釉细胞 Bc I-2及Bax蛋白表达的影响 摘 要 目的：利用氟病区煤烘玉米建立燃煤型氟斑牙大鼠模型，观察SD大鼠食用含氟煤烘玉 米后牙齿成釉细胞形态发生的改变，以及氟对大鼠牙齿发育过程中凋亡抑制基因Bcl．2、 Bax在成釉细胞中表达的影响，探讨燃煤型氟斑牙发生的分子机制和预防控制措施。 方法：该实验包括两部分： 实验一燃煤型氟斑牙动物模型的建立 1、动物的选择、分组及饲养：50只3周龄的SD大鼠，雌雄各半，随机分为5组，每 组lO只，雌雄各5只，分笼喂养，每12小时明暗交替，自由饮食，分别为： ①高氟组：饲以含氟量为88mg／kg的玉米，配以面粉、豆粉、鱼粉、骨粉、麦麸和食盐： ②中氟组：饲以含氟量为56mg／kg的玉米，配以面粉、豆粉、鱼粉、骨粉、麦麸和食盐； ③低氟组：t司以含氟量为30mg／kg的玉米，配以面粉、豆粉、鱼粉、骨粉、麦麸和食盐； ④阳性对照组：给予饮用100mg／L的氟化钠水溶液，配料成分中玉米为不含氟的玉米， 配以面粉、豆粉、鱼粉、骨粉、麦麸和食盐； ⑤阴性对照组：饮用水中含氟量为0．08ppm，饲料配方中不含氟。 2、观察指标及方法 ①实验开始时和每周后分别称量体重，观察大鼠一般情况，记录体重变化。 ②在一月末和三月末分别进行尿样和血样采集，用氟离子选择电极法测定尿液和血清中 氟离子的含量。 ③在一月末及三月末检查氟斑牙的发生情况，根据氟斑牙分级标准对各组大鼠氟斑牙进 行记分，并在实验前后用游标卡尺测量牙齿长度。 ④当观察到大鼠牙齿出现明显的氟斑牙时即处死取材，取出牙齿和下颌骨。常规制作石 蜡切片，HE染色，观察大鼠成釉细胞和成牙本质细胞的形态学改变。 遵11天-．学院硕lj论文 燃煤型氟斑牙动物模型的建市和过量氟对模型人鼠成釉细胞Bcl．2及Bax生[J表达的影响 采用免疫组化方法，观察成釉细胞中相关凋亡基因Bcl．2及Bax的表达。在光学显微 镜下，将切片的数字化图像输入多媒体分析系统，把阳性表达的强度转化为数字信号， 对免疫组化的阳性区域的染色强度进行半定量分析，每例随机选取6个视野，测定Bcl．2 及Bax免疫组化光密度值，取均值作为测量值。 结果： l、大鼠的一般情况及体重变化：阴性对照组的大鼠被毛光滑，有光泽，反应灵敏，实 验组的大鼠被毛失去光泽，反应迟钝，阴性对照组大鼠体重增加较实验组明显，差异有 显著性(KO．05)。 2、实验组大鼠血氟、尿氟水平在三月末均高于一月未，差异有显著性(P0．01)：实验 组大鼠血氟、尿氟同期水平为高氟组．中氟组低氟组阴性对照组，两两比较，差异 有显著性(P0．01)。 3、模型复制3个月后肉眼观察到阴性对照组大鼠的牙齿呈半透明棕黄色，光滑而有光 泽，实验组大鼠牙齿由棕黄色转变为淡黄色，部分区域有白垩色不透光改变，甚至出现 白色条纹或斑点，继而形成白色斑块。严重者出现釉质缺损，牙齿长度磨损变短的现象。 4、模型大鼠氟斑牙记分：随着染氟时间的延长和染氟剂量的增加，实验组大鼠牙齿大 部分棕色横纹消失，整个牙面呈白粉笔样，大多伴有牙体缺损：高氟组记分为3级的数 量最多，达到8例，中氟组、低氟组、阳性对照组依次减少，阳性对照组仅3例，阴性 对照组记分均为0级；高氟组、中氟组与低氟组和对照组比较，差异有显著性(P0．01)。 5、牙齿长度测量：实验组大鼠牙齿长度在三月末明显短于一月末，染氟组与阴性对照 组比较有显著性差异(P0．01)，高氟组牙齿长度最短，与各组比较均有显著性差异(P O．05)。 6、HE染色结果：阴性对照组大鼠切牙从根端向切端，成釉细胞由卵圆形逐渐向高柱状 分化，成熟的成釉细胞成高柱状，排列均匀一致，釉质成熟期后成釉细胞逐渐由高柱状 向矮立方状转化，成牙本质细胞排列整齐呈栅栏状，牙本质均匀一致，其间可见牙本质 小管，牙髓细胞分布均匀：低氟组成釉细胞排列不规则，原有的高柱状结构变矮，少量 细胞发生扭曲，成牙本质细胞排列紊乱；高氟组成釉细胞排列极不规则，大量细胞扭曲， 釉质变薄。 ．6． 遵义医学院硕l‘论正 燃煤型氟斑牙动物模型的建证和过量氟对模型大鼠成釉细胞Bcl．2及Bax蛋白表达的影响 均有表达，定位于细胞胞浆