中华绒螯蟹短尾化发育相关基因筛选.pdfVIP

摘要 中华绒螯蟹短尾化发育相关基因筛选 查 杰 （南京师范大学生命科学学院生物多样性与分子进化实验室，南京 210046 ） 摘 要 本研究采用正、反向抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization，SSH）技术 分离中华绒螯蟹幼体在发育过程中的短尾化变态发育特异表达基因的 EST ，获正向消减文库 含 374 个重组子，反向消减文库含 985 个重组子。PCR 扩增鉴定 95%的正、反向消减cDNA 文库的插入片段平均大小分别约为 440 bp 和 380 bp，表明所构建的消减 cDNA 文库适合进 一步研究中华绒螯蟹短尾化发育相关基因。 对两文库克隆子进行合并重复序列，分别得到 130 个独立转录本和 195 个独立转录本。 并且按照同缘性比对结果对这些独立转录本进行聚类，两文库分别得到 11 个功能范畴与 5 个功能范畴，都涉及细胞加工、核糖体蛋白质合成、蜕皮、信号转导、发育、能量代谢、免 疫与压力调控、线粒体膜蛋白合成、分子伴侣、激素代谢和类白斑病毒基因。 根据 EST 分析结果，分别用 5RACE 和 3RACE 技术从中华绒螯蟹基因组中获得了 1 个锚蛋白基因（命名为 EjsANK ）的全长cDNA 序列，EjsANK cDNA 全长为 4, 375 bp 并包 含 1 个 1, 095 bp 的开放阅读框，编码 364 位氨基酸的蛋白。用荧光定量 PCR 结果表明该基 因在三个发育时期的不同组织中均有表达，但腹部组织表达水平变化最明显，且在仔蟹I 期 腹部的表达量最高（P0.05 ）。根据生物信息学预测分析结果，EjsANK 蛋白与 IκB 蛋白有 较多相似性，因此本文假设 EjsANK 蛋白很可能与短尾化相关，并且以类似 IκB 蛋白的方式 参与调控。 关键词：中华绒螯蟹；短尾化；抑制性消减杂交；表达序列标签；cDNA 末端快速扩增；锚 蛋白基因 i Abstract Screen of genes involved in the brachyurization development of Chinese mitten crab (Eriocheir japonica sinensis) Zha Jie (Jiangsu Key Laboratory for Biodiversity and Biotechnology, College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing 210046, P. R. China) ABSTRACT Suppression Subtractive Hybridization，SSH technique was performed to enrich the EST of differential expressed genes which may be involved in the brachyurization. As a result, we obtained 374 positive clones and 985 positive clones respectively from SSH1 Library and SSH2 Library, we can identify about 95% of all the positive clones includes 380~440 bp fragments from the