TGF-β1及信号蛋白在脂多糖介导的腹膜间皮细胞损伤中的作用及其机制.pdfVIP

博士论文TGF·口1及其信号蛋白在脂多糖介导的腹膜间皮细胞损伤中的作用及机制 TGF．13 1及其信号蛋白在脂多糖介导的腹膜间皮细 胞损伤中的作用及机制 博士研究生： 冯明亮 导 师： 余学清教授 专 业：内科学 中文摘要 腹膜透析(Pedtoneal dialysis，PD)是肾脏替代治疗的主要方法之一。近年来随 着腹膜透析技术的不断进步，特别是透析连接系统的改进及透析液生物相容性的 提高，腹透炎的发生率明显降低。尽管如此，腹膜透析相关性腹膜炎仍然是腹膜 透析的主要并发症，是导致腹膜纤维化及腹膜透析失败的主要原因之一。目前为 止，腹膜透析相关性腹膜炎的病理机制尚不十分清楚，探讨腹膜透析相关性腹膜 炎的病理损伤机制，并寻找有效方法进行防治，具有重要的l临床意义。 生理浓度的TGF．Bl对于组织的修复和维持器官的正常功能是必需的，但过 度表达的TGF．B1与某些疾病紧密相关，如组织的纤维化。另外一方面，TGF．[31 也可调节机体的免疫系统与炎症的反应。普遍认为，TGF．B1起到免疫抑制的作 用。有学者在炎性肠病的研究中发现TGF．B／Smads信号通路可以通过上调ltcBa 的转录水平抑制炎症反应的主要信号通路NF．r．B的活化，从而发挥其抑制炎症 的作用。 我们既往的研究结果发现，在大肠杆菌介导的急性腹膜炎症中， TGF．p／Smads信号蛋白显著显著上调并被激活。在此腹膜炎模型，上调表达 Smad7进一步加重了腹膜炎症，损害了腹膜功能。但其机制如何尚不清楚。我们 推测，TGF-[31具有双重作用，致纤维化和抗炎作用。在急性细菌性腹膜炎模型， 上调表达TGF．pl在抑制炎症反应方面发挥重要作用，上调表达TGF．p1抑制性 信号蛋白Smad7可能过度抑制了TGF．B1的抗炎作用，恶化了急性腹膜炎状态。 为了进一步证实我们的推测，我们设计了如下实验：1．首先用大肠杆菌主要胞壁 成分LPS刺激体外培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)，观察其对炎症因子， 一I一 竖主论文TGF-声l及其信号蛋白在睹多糖介导的腹膜间皮细胞损伤中的作用及机制 刺激，观察其对炎症因子及NF．r,B表达的影响。从而为腹膜透析相关性腹膜炎 的防治提供新的依据和途径。 一．LPS刺激大鼠腹膜闯皮细胞体外模型的建立 (一)方法 别用RT-PCR，免疫细胞化学，ELISA，IF和WesternBlot方法检测mRNA水 平和蛋白水平的变化。 (二)结果 1．大鼠腹膜问皮细胞的鉴定： RPMCs呈圆形、椭圆形、多边形等，融合后呈典型的铺路石样；RPMCs抗 细胞角蛋白抗原阳性。 2．LPS对大鼠腹膜间皮细胞表型及产生炎症因子(TNF-a和tL-6)的影响： LPS刺激RPMCs 24h后，铺路石样的正常腹膜间皮细胞变为梭形的成纤维 细胞样形态，细胞间隙增宽；LPS可使腹膜间皮细胞E．Cadherin的表达减少。另 外，LPS可刺激腹膜问皮细胞产生与分泌炎症因子增多。 3．LPS对TGF-131和NF-v,B的影响： LPS刺激RPMCs 24h后，TGF．131的合成与分泌增多，NF-rB被激活。 (三)结论 症因子(TNF-a，IL．6)、TGF．B1增多，同时激活NF．r,B。 二．TGF-B 1对LPS刺激大鼠腹膜间皮细胞产生炎症因子及NF-KB的影响 (一)方法 签士论文——TGF一声l及其信号蛋白在晤多撼介导的腹膜阃皮细胞损伤中的作用及机制 鼠腹膜间皮细胞24h，分别用RT-PCR，ELISA和Western Blot方法检测TGF．B1 对LPS刺激RPMCs产生炎症因子及NF．r,B的影响。 (二)结果 1．炎症因子的变化： 用。 2．NF-r,B的活化： TGF-131可抑制LPS激活NF-r．B的反应。