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MiR-217 对乳腺癌上皮细胞甲基化关键基因调控作用的研究 中英摘要 MiR-217 对乳腺癌上皮细胞甲基化关键基因 调控作用的研究 中文摘要 目的：探讨在人乳腺癌上皮细胞系中，miR-217 通过直接作用于DNMT1 与EZH2 3´UTR 调控DNMT1 及EZH2 转录后表达水平，为后期动物实验和临床试验提供实验 基础。 方法：首先利用实时定量 PCR 技术，检测 HBL-100、MCF-7 和 MDA-MB-231 三株人乳腺上皮细胞系中miR-217 和EZH2 转录后表达水平；利用Western blot 技术 检测三株细胞系中EZH2 蛋白表达水平；筛选用于“过表达、抑制miR-217 实验” 的细 胞。然后利用瞬时转染技术，在低表达miR-217 细胞中，转染miR-217 模拟物；在高 表达miR-217 细胞中，转染miR-217 抑制物，进行miR-217 的过表达、抑制实验。 最后，将含有miR-217 野生型及突变型识别位点的DNMT1 及EZH2 3´UTR 质粒载体， 分别转染293T 细胞，检测其相对荧光素酶活性的改变。 结果：RT-PCR 结果显示，与正常乳腺上皮细胞系HBL-100 比较，EZH2 在乳腺 癌上皮细胞系MCF-7 和MDA-MB-231 中显著高表达(P0.05) ；而miR-217 显著低表 达(P0.05) 。Western blot 检测结果显示，EZH2 在正常乳腺上皮细胞系HBL-100 中低 表达，乳腺癌上皮细胞系MCF-7、MDA-MB-231 中高表达。三阴性乳腺癌上皮细胞 系MDA-MB-231 中过表达miR-217 ，DNMT1 和EZH2 蛋白表达下降；乳腺上皮细胞 系HBL-100 中抑制miR-217 表达，DNMT1 和EZH2 蛋白表达增高。293T 细胞中检 测海肾和荧火虫两种荧光素酶活性，双荧光素酶检测结果显示，DNMT1-UTR-WT 的 相对荧光素酶活性显著低于 DNMT1-UTR-MUT(P0.05) ，具有统计学意义； EZH2-UTR-WT 的相对荧光素酶活性显著低于EZH2-UTR-MUT(P0.05) ，具有统计学 意义。 结论：在人乳腺癌上皮细胞系中，miR-217 下调DNMT1 及EZH2 蛋白表达，且 通过直接作用于DNMT1 、EZH2 3´UTR 下调其表达。 关键词：miR-217 ；DNMT1 基因；EZH2 基因；HBL-100；MCF-7 ；MDA-MB-231 作 者：王璐璐 指导教师：冯 景 I Abstract The research of the regulation of miR-217 to the methylation key genes in breast cancer cells The research of the regulation of miR-217 to the methylation key genes in breast cancer cells Abstract Objective: To discuss miR-217 could directly regulate the expression level after transcription of DNA methyltransferase1 (DNMT1) and Enhancer of Zeste homolog2 (EZH2) by targeting on DNMT1 and EZH2 3´untranslated region (3´UTR) in breast