D型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的研制及其保护效果的评价.pdf

课题资助 国家自然科学基金2012年面上项目 1 国家科技支撑项目课题[202BAD39802] 符号说明 目录 中文摘要………………………………………………………………………………I Abstract……．．……．……．…．．…………．…．．．．……．………………．……．．．．…………．……．……．…．．…．．II 1．引言…………………………………………………………………………………………………．1 1．1产气荚膜梭菌简介………………………………………………………………．1 1．2产气荚膜梭菌病在国内外流行状况……………………………………………．4 1．3产气荚膜梭菌疾病致病机理及防控措施………………………………………．6 2材料与方法…………………………………………………………………………．8 2．1菌种与培养基……………………………………………………………………．．8 2．1．1 D型产气荚膜梭菌种……………………………………………………………8 2．1．2 5％绵羊血．1％葡萄糖琼脂基础平板……………………………………………8 2．1．3产毒素培养基——Gardon汤…………………………………………………．．9 2．1．4 PBS(1000ml配制……………………………………………………………．．9 2．1．5硫乙醇酸盐流体培养基………………………………………………………．．9 2．2实验动物…………………………………………………………………………．．9 2．3主要试剂及仪器…………………………………………………………………．9 2．4主要试剂的配制…………………………………………………………………10 2．4．1饱和硫酸铵的配制……………………………………………………………．10 2．4．2聚丙烯酰胺凝胶电泳主要试剂及配制………………………………………．10 2．4．2．1 30％丙烯酰胺的配制………………………………………………………．．10 2．4．2．2 10％SDS的配制………………………………………………………………10 2．4．2．31．5M Tris．CL的配制………………………………………………………………．10 2．4．2．4 10％APS的配制……………………………………………………………一10 2．4．2．5 Buffer的配制………………………………………………………10 Running 2．4．2．6染色液的配制………………………………………………………………．．10 2．4．2．7脱色液的配制………………………………………………………………．11 2．4．3汞类防腐剂残留量测定主要试剂及配制……………………………………．11 2．4．3．1 0．05％双硫腙浓溶液的配制………………………………………………11 2．4．3．2 0．00125％双硫腙滴定液的配制……………………………………………．11 2．4．3．3 20％盐酸羟胺试液的配制…………………………………………………．．11 2．4．4甲醛残留量的测定主要试剂及配制…………………………………………11 2．4．4．1醋酸—醋酸铵缓冲液配制…………………………………………………．．11 2．4．4．2乙酰丙酮试液配制…………………………………………………………．11 2．4．4．3甲醛溶液含量标定…………………………………………………………．11 2．5试验方法……………………………………………………………………………1l 2．5．1菌种的复苏……………………………………………………_………………11 2．5．2细菌增菌………………………………………………………………………。12 2．5．3毒素的制备……………………………………………………………………．．12 2．5．4验证毒素0t．、￡的存在…………………………………………………………12 2．5．4．1．1 D型产气荚膜梭茵外毒素粗提……………………………………………12 2．5．4．1．2粗提毒素聚丙烯酰胺凝胶电泳…………………………………………。12 2．