玻璃微流控芯片表面处理和其在DNA分析中的应用.pdf

一 ，．+＼ 一 遁 ～要～ 一中一一文一 一赢一 玻璃微流控芯片表面处理及其在 DNA分析中的应用 前 言 Total 微型全分析系统(Miniat面zedAnalysisSystems，斗7rAs)是当前世 界上最前沿的科技领域之一，其目的是通过化学分析设备的微型化和集成 化，最大限度地把分析实验室的功能集成到便携的分析设备中，甚至是方寸 a on 大小的芯片上，即“Lab chip”。微流控芯片是MlAs当前最活跃的研究 领域，以微通道网络及众多分析功能元件的集成化为其结构特征，不仅使试 样和试剂的消耗显著下降，而且具有高效、高速、高通量的分离分析能力。 生物医学是当前微流控芯片的主要应用领域。芯片毛细管电泳是以微 流控芯片上的微通道作为分离通道的分离分析技术。因微通道比表面积显 著增大，焦耳热能很快向四周溢散，所以可施加平板凝胶电泳难以达到的高 场强，从而实现对样品的快速、高效的分离检测。 微流控芯片的微米级结构显著增大了微通道的比表面积，所以保持其 内表面的物理化学性质的平衡、稳定具有十分重要的意义。 玻璃具备优良的光学性能，且易于进行表面改性，是最广泛使用的芯片 基材之一。玻璃微流控芯片在进行电泳分析时，因微通道内表面一si0H 基团上的H+解离，当在微通道两端施加外电场时，通道内整个缓冲溶液会 流向阴极，形成电渗流(ElectroosHloticnow，EOF)。EOF不仅导致微通道表 面对DNA样品的吸附而且严重影响玻璃芯片对DNA样品的分离效能，所 以有效抑制EOF是玻璃芯片获得高分离效率的前提。 对芯片微通道进行表面改性处理是一种控制EoF的常用方法，可分为 动态涂层和永久表面改性。前者是最简单的表面改性方法，改性化合物可 通过物理吸附结合在微通道表面实现动态涂层。但因表面涂层不能长期保 持稳定状态，其应用受到限制。后者是控制EOF和减少样品一表面吸附的 最有效的方法。硅烷化试剂常用于永久改性处理中，其与微通道表面一 siOH基团可共价键合，也可进一步将线性聚合物交联固定在通道表面形成 涂层以屏蔽一Si0H基团，从而有效抑制EOF和通道表面对DNA样品的吸 附，提高芯片电泳的分离效能。但硅烷化试剂与一si0H基团形成的共价 键在偏碱性条件下可能会分解，使经过硅烷化处理的芯片在使用碱性电泳 筛分介质时分离效能下降。 本研究提出了一种针对玻璃芯片微通道新的表面处理方法，即将硅烷 化与静置动态涂层处理相结合对微通道进行表面改性，探讨了其对芯片分 IIIRF 离效能的影响。通过检测芯片对似174一HaeDNA标准样品和PCR 产物的分离效能，考察对微通道进行硅烷化结合静置动态涂层表面改性的 效果。采用共聚焦型激光诱导荧光检测装置对荧光信号进行检测。为了验 光检测体系下，在经过表面改性的玻璃芯片上对DNA标准样品进行分离检 测。 实验材料和方法 利用标准光刻和湿法刻蚀技术在玻璃基片上刻蚀出十字形微通道网 络，采用热键合方法将其与盖片进行封接，在微通道末端粘接储液池，制成 玻璃微流控芯片。微通道表面改性包括三个处理过程：①将含有I．5％ 充入制作完成的芯片微通道中，芯片置于密闭容器中存放，即对微通道表面 进行静置动态涂层处理。②使用硅烷化试剂对制作完成的芯片微通道表面 进行硅烷化改性处理。③使用硅烷化试剂对玻璃芯片微通道进行改性处理 置于密闭容器中存放，即对微通道表面进行硅烷化与静置动态涂层结合处 理。在倒置生物显微镜上搭建共聚焦型激光诱导荧光检测装置，采用半导 体激光器作为激发光源，产生的荧光信号经光电倍增管收集后由记录仪记 录。利用高压电源提供芯片微通道高电场，采用夹流进样方法进行DNA样 品的进样和分离操作，并优化HEC浓度、电场强度电泳条件，在此条件下考 察DNA标准样品中11个片段迁移时间的重现性。在该检测体系下对PCR 产物(144 种荧光标记体系下考察该表面处理方法的适用性。 ·2·