Twist和耐药相关蛋白在乳腺癌中的表达及其紫杉醇耐药MCF-7细胞株的差异蛋白质组分析.pdf

l l I ㈨Ill IIIIII III l l l IIf Y1 785099 Twi st和耐药相关蛋白在乳腺癌中的表达及紫杉醇耐药MCF-7细 胞株的差异蛋白质组分析 摘 要 目的：作为最常见的恶性肿瘤之一，乳腺癌严重威胁着现代女性的健 临床上耐药的发生往往导致患者治疗失败和死亡。近年来的研究表明，转 录因子Twist能促进肿瘤耐药的形成，但是其机理的研究还远未深入。基 于此，本研究采用免疫组织(细胞)化学技术来探讨Twist以及多药耐药 ResistanceRelated 相关蛋白(Multidrug CancerResistance Protein，LRP)、 (P-Glycoprotein，P—gP)、肺耐药蛋白(1ung 拓扑异构酶II II II)四种耐药相关蛋白在人乳腺 a,TOPO a(Topoisomeerase 癌组织和紫杉醇耐药的人乳腺癌细胞株MCF．7中的表达情况，在人体组 织、细胞层面揭示Twist和肿瘤细胞耐药的相关性；采用双向电泳 (Two．dimensional 获得性耐药过程中主要差异表达蛋白，为进一步揭示乳腺癌紫杉醇耐药机 制，并为探索新的治疗耐药肿瘤的分子靶点提供实验依据。方法：1、采用 免疫组织化学技术检测人乳腺癌组织和癌旁组织中Twist蛋白与MRP、 II表达之间的相关性。2、以人乳腺癌细胞株MCF．7和 P．gP、LRP、TOPO 由紫杉醇诱导的耐药株MCF．7／Taxol(又分为四个药物诱导阶段细胞株， 分别称为：MCF．7／Taxol、MCF．7／Taxol TOPO II的表达相关性。3、分别提取MCF．7和四种耐药细胞总蛋白，通过 双向凝胶电泳分离，即第一向采取固相pH梯度等电聚焦电泳，第二向采 向电泳图像分析软件对2．DE图谱进行数字化分析匹配与对比，寻找差异 蛋白质。结果：1、在乳腺癌和癌旁组织中Twist与各耐药蛋白的表达存在 显著差异，阳性反应均为棕色。Twist与MRP、TOPO II、P—gP三种耐药 而LRP的棕色颗粒却减少，染色变浅。3、初步建立和优化了MCF．7细胞 的双向电泳技术，并获得了比较清晰的电泳图谱。图像分析显示MCF．7和 2-DE MCF．7／Taxol的双向电泳图谱相似，蛋白点位置重复性较好。MCF．7 2．DE图谱作 75．3％。两种细胞图谱中差异表达的蛋白斑点有13个。结论：1、在癌组 织中Twist与MRP、TOPO II、P—gP的高表达具有高度的一致性，提示Twist 与人乳腺癌耐药性的形成具有相关性。2、与亲本细胞相比，MCF．7／Taxol 细胞紫杉醇耐药性逐渐形成的过程中，Twist的表达增高，并且与常见耐药 蛋白的表达量增高呈现同步性，提示Twist在乳腺癌紫杉醇获得性耐药中 发挥了重要作用，并与耐药蛋白的高表达具有相关性。3、初步分析了MCF-7 及其对应的耐药细胞株MCF．7／Taxol之间存在的差异表达蛋白，可初步确 关核蛋白，它们分别涉及肿瘤转移、能量代谢、