乳腺癌转移相关基因及其蛋白质的筛选和鉴定.pdfVIP

呈!墅竺!型塑堡垦!￡曼!!塑望窭!塑翌 乳腺癌转移相关基虱及蛋白质的簿选与鉴定 中文摘要 第一部分：AFIQ基因对乳腺藏细胞侵袭转移潜能的影响及其作用机制 与其它实俸肿瘤相似，远赶靶器官转移是乳腺癌致死的主簧原因。迄今为止，其分 子机制尚不清楚。我们实验蜜前期的工作，通过体内连续筛选方法建立了乳腺癌踌转 移裸鼠移植瘟模型，以及高肺转移潜能的人乳腺癌细胞株MDA．MB．435HM，并运用 胞系的基因表迭谱差井，发现60个熬因显著差异表迭。其中，癌基因AFIQ在高转 上调表达与白血病及甲状腺癌发生有荧。但迄今为止，尚不清楚AFlQ基因是否参与 了乳腺癌转移过程，以及在乳腺癌转移过程的诈愿机制。 本实验探讨AFIQ隳因在体内、外对人乳腺癌细胞椿侵袭转移潜能的影响及其可能 细胞体，}侵袭漤能的影响，并以Western blotting方法观察提美基霹袁逸转变49；建立 相应的人癌裸鼠原位移植瘤模型以验证体外实验的观察结果；应用RT-PCR方法分析 AFtQ基因套{洛床葶I艨癌纽织中的表逸及英与溶巴结转移酶关系。鹭袈显示，AFlQ PostdoctoralWork Report,FudanUniversity RhoC uPA，uPAR，cathepsinD，maspin，cystatinC，VEGF及bFGF表迭水平均未见明湿变化 及RhoC蛋白的表这。裸鼠移植瘤实验表明，AFlQ能促进原位肿瘤生长、肺转移病 PCR方法分析50例临床外科切除的乳腺癌组织标本，结果溉示AFlQ基因在78％ (39／5∞的嚣艨癌组织审高表达。统诗分析显示，AFlQ高表达与瀑巴鳃转移呈正媚关 表迭有关。 第二部分：乳腺癌转移相关候选蛋白质的癍逸与鉴定 近年来，蛋白质组学技术在寻找肿瘤早期诊断的生物标志物及新的分子治疗的药 靶、谬价药物蟪跨效穷磊取缮了较大选襞。镶迄今为点，应用簧鸯蜃缎学技术探讨乳 腺癌转移发生的相关文献较少。本研究以本实验室建立的高、低肺转移潜能人乳腺癌 细惑椿为实验模墨，采弼蛋白袭纽学技术毙较其蛋白壤表这谱差异，双筛选争鏊定乳 腺癌转移相荚簧白质。采用固相pH梯度双向凝胶电泳(2-DE)技术，分离具有相同 的总蓊白质，银染显色，获得了重复性和分辨率均较好的双向电泳银染鸡谱。MDA— 2-DE软件分橱差异表达晦蚤巍质，发照MDA—MB。 3．7％及93。6嗲赫3．9％。PDQuest 采用生物震谱签定技术，对部分差暑簧盘点瑙波褪色溪一离子跨-痿谱蕊c。IT-MS)分持 4 兰竺堡然!竺壁!苎!篓!墨望!篓!!!塑望攫：!堡i堑 其胶内酶解后的肽谱和各肽段的氨基酸序列，用SEQUEST软件查询NCBI蛋白质数 据霹，成功鍪定了11个乳骧癌转移翻美候遗蚕白质。包括组织蛋白酶前体(CATD)、 peroxj．redoxin l，4)、热休克蛋 6(PDX6)、旺晶状体球蛋(CRAB)、原肌球器白1-4(TPM 信号转导争免疫调节等多砖生蟪功能以及许多未知功能。随机选取了4令差异经选蛋 白质，包括抗氧化蛋白peroxiredoxin blotting方法在高、 暴与螯鸯质照学结论黎拳一致。这些终暴为下一步探讨这些候选蛋白矮在乳稼癌转移 过程的功能及其作用机制打下了基础。 关键阔 霉I稼藏；转移；基黪表达谱；AFlQ；双向凝黢电承；痿谱；簧白质鳃 PostdoctoralWork Report。FudanUniversity IdentificationofBreastCancer Gene BasedoncDNA andProteins