葡萄金黄化植原体基因芯片检测技术及其RFLP研究分析.pdf

葡萄金黄化植原体基因芯片检测技术及RFLP分析的研究 摘 要 本研究通过对植原体15 个组主要代表种的16SrDNA 序列比对分析，设计植原体基 因芯片引物及探针，以期为葡萄金黄化植原体（Flavescence dorée，FD ）的检测及植原 体各亚型的鉴定提供一种快速、灵敏、高通量的检测途径。研究所设计的芯片引物扩增 植原体得到的片段大小 （约290bp ）均与预期结果一致，说明所建立的荧光标记PCR 反 应体系正常；探针特异性检测试验表明：植原体属探针（Phy 探针）只有在检测植原体 时才出现阳性信号，FD 探针只有在检测16SrV 植原体时才出现阳性信号，PaWB 探针 只有在检测泡桐丛枝病（PaWB）植原体时才出现阳性信号，说明所设计的探针特异性 强；灵敏度检测试验表明：利用FD 基因扩增产物构建质粒检测基因芯片的检测灵敏度 3 达模板量10 拷贝/L，灵敏度要高于普通PCR，且通过检测结果可直接对不同植原体 种做出准确鉴定，还具有可同时检测多种样品中不同病原的特点；芯片稳定性验证结果 表明：本研究所设计的芯片重复性好、稳定性强，相同杂交条件下，批次内和批次间的 基因芯片都可检测到明显的杂交信号，但不同批次及批次间的芯片检测信号存在一