绒山羊淋巴细胞有丝分裂中期化的条件摸索及其Y染色体的微分割的分析.pdfVIP

摘 要 绒山羊属于绒、肉、皮兼用型品种，具有极高的经济价值，接受了长达数年的 自然进化以及人类在生产繁育过程中改良出来的，在一些特定的生态环境之中生存， 属于重要的家畜资源。由于目前的生态环境恶化，绒山羊的生长条件渐渐恶化，导 致优质种羊匮乏且产绒质量下降，因此加强绒山羊的品质已经迫在眉睫。雄性的绒 山羊在繁殖后代过程中其遗传基因对后代有很大的影响，而且由于它的产绒量本身 极高，因此培育出产绒性状好的优良种山羊意义十分重大。然而想要培育优良性状 的种山羊离不开Y染色体的研究，世界上至今还未完成山羊Y染色体测序，因此获 得绒山羊的纯度较高的Y染色体至关重要。为此，本研究通过激光显微切割系统成 功的获取纯度较高的绒山羊的Y染色体。 实验通过分离培养外周血淋巴细胞，用试剂PHA(植物血球凝集素)和ConA (刀豆蛋白A)对淋巴细胞进行刺激培养，培养一定时间后加秋水仙素使淋巴细胞 停滞在G2／M期，对这一过程的各个环节的条件进行摸索，找出能够富集大量有丝 分裂中期细胞的最佳条件。收集大量处于中期的细胞制备很好的染色体核型，使用 激光显微切割系统获得Y染色体。 1．淋巴细胞中期化的条件摸索 (1)不经过任何刺激的淋巴细胞培养48h时收集，经流式细胞仪检