抗原抗体反应检验系.ppt.ppt

“纲举目张”释义，纲指鱼网上的总绳，目指网眼。把大绳子一提起来，一个个网眼就都张开。比喻抓住事物的关键，带动其他环节。 第七章 抗原抗体反应 抗原抗体反应 基本概念 抗原: 　是能够刺激机体免疫系统诱导免疫应答,并能与相应免疫应答的产物(抗体或致敏淋巴细胞)在体内或体外发生特异性的结合反应的物质。 抗体: 　是Ｂ细胞识别抗原后活化增殖分化为浆细胞所产生的一类能与相应抗原特异性结合的球蛋白。 抗体的结构及其多样性 抗原决定簇（epitope） 1．抗原决定簇又称表位（epitope），是指抗原性物质表面决定该抗原特异性的特殊化学基团，是免疫应答和免疫反应具有特异性的物质基础。　　2．抗原决定簇是很小的，其大小相当于相应抗体的结合部位，它们可由5-7个氨基酸、单糖或核苷酸残基组成。　　3．抗原结合价：是指能与抗体分子结合的抗原决定簇的总数。每一种半抗原可理解为单一的抗原决定簇，而天然抗原含有很多不同的抗原决定簇，它是带有大量多种天然半抗原的大分子。 第一节 抗原抗体反应原理 抗原抗体反应的二阶段性 第一阶段为抗原抗体特异性结合阶段，反应速度快，几秒钟或几分钟即可完成，但不出现肉眼可见反应。 第二阶段为可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等反应，本阶段有两个特点，一是反应进行慢，需要几分钟、几十分钟或更长。其二是受电解质、温度、酸碱度等多种因素影响。 K=K1/K2 K:亲和常数 K1:结合常数 K2:解离常数 第二节 抗原抗体反应的特点 抗原抗体动态平衡公式 K1 [Ag]+[Ab]?[Ag-Ab] K2 K1结合常数 K2解离常数 　抗原抗体复合物解离取决于： 抗体对相应抗原的亲合力 环境因素　 环境因素：pH过高过低、高离子强度等。 常用于解离抗原抗体复合物的物质有： 3mol/L硫氰化钾、pH2.4 0.1mol/L甘氨酸、 7mol/L尿素等。 解离后抗原抗体仍保持原有特性。 第三节 抗原抗体反应影响因素 颗粒性Ag+Ab→凝集反应 可溶性Ag+Ab→沉淀反应 单价抗Ag与Ab→不出现沉淀反应 作用时间 抗原抗体反应应有足够的时间，不同反应时间不同。 第四节 抗原抗体反应类型 1．什么是抗原抗体反应？ 抗原抗体反应的原理是什么？ 2．抗原抗体的结合力有哪些？ 3．抗原抗体反应有哪些特点？ 4．如何理解抗原抗体反应的特异性和交叉反应？ 5．什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？ 6．如何理解抗原抗体反应的亲和力和亲合力？ 7．抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？ 8．抗原抗体反应有哪些影响因素？ 9．基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪些？ 10．什么是标记免疫技术？标记免疫技术有哪些类型？ 一、 特异性（specificity） *概念：抗原分子，只能与由它刺激所产生的抗 体结合而起反应的专一性能。 *决定因素：由抗原决定簇和抗体分子超变区之 间空间结构的互补性决定的。 抗体分子N端可变区形成3nm×1.5nm×0.7nm的槽沟，只有与其空间结构互补的抗原决定簇才能如楔状嵌入。 特异性示意图 *交叉反应(cross reaction) 两种不同的抗原 物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇 (共同抗原)，则可与彼此相应的抗体反应。 *最适比:是指抗原与抗体发生可见反应，需遵循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时，才出现可见反应。 二、比例性（proportionality） 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 各管抗原倍比稀释 加入抗血清 各管抗体量不变 振摇 混匀、37℃孵育 沉淀量不同 出现沉淀量最多的管为最适比例管。 轻摇 絮状沉淀试验 絮 状 沉 示 意 图 淀 Ag Ab Ag 等价带(equivalencezone)抗原与抗体分子比 例合适的范围。 带现象：Ag与Ab比例不适而不出现可见反应。 * 前带(prozone) 抗体过量时。 * 后带(postzone) 抗原过量时。 比例性示意图 抗体过量 比例合适 抗原的量 抗原过量 抗体沉淀的量 前带 等价带 后带 三、可逆性（reversibility) 概念：是指抗原与抗体结合成复合物后，在 一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。 抗体 混有SPAg 抗体-SPAg 抗体-SPAg 分离剂 一、抗原抗体结合 可逆性示意图 抗体